[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィックRestoretm) Westren Blott Striping Buffer

Restore^TM Western Blot Stripping Buffer

抗原にダメージを与えないマイルドな抗体剥離バッファーです

電気泳動の結果を待ちくたびれている方に朗報です。
アッセイ条件の最適化はウェスタンブロットでは必要なプロセスですが、抗体希釈率の最適化の為に電気泳動から繰り返すことは、試料と時間の無駄になります。抗体のストリップとリプローブ（剥離と再プローブ）は条件の最適化だけではなく、同一のブロットを別の抗体により再プローブしたい場合に使用される手法です。一般的なストリップバッファーは独特の臭気をもつメルカプトエタノールを含み、抗体を剥離する際にメンブラン上の抗原にダメージを与えるため、再ブロッキングを必要としたり、再プローブで抗体濃度を高めたり、フィルムへの感光時間を延長する必要があるとされます。Restore^TM Western Blot Stripping Bufferは、メルカプタンを含まないマイルドな組成で抗体を剥離するため抗原を傷めることもありません。1次抗体のアフィニティの強さにもよりますが、5-15分間でストリップは完了します。StartingBlock^TMで転写膜をブロックしている場合は、剥離後の再ブロッキングは不要です。

特徴/利点:

時間短縮　－　電気泳動を改めてする必要はありません
サンプルの節約　－　同じサンプルを使って再び抗原抗体反応ができます
効率的に抗体除去　－　独自開発したバッファーが効果的に作用し、抗体除去します
穏和な試薬　－　抗体除去や２度目の抗原抗体反応の際に目的タンパク質にダメージを与えません
無臭　－メルカプタンが含まれないので還元剤独特のあの臭いがありません
経済的　－　市場にでているストリッピングバッファーに比べてお得です

アッセイ条件の至適化 RestoreTM Stripping Bufferによる抗体除去と再プローブを1サイクル行い、2次抗体濃度がどのように最適化されるかをSuperSignalRWest Pico化学発光基質を用いて示した。

	図１：抗体濃度の至適化条件 IL-2 (20 ng-0.156 ngまで系列希釈) をウェスタンブロットに供し、SuperSignal^® West Pico Chemiluminescent Substrateにより検出した。１回目のブロット(A)では1次抗体(anti-Mouse IL-2, BD Pharmingen)を1/1,000希釈(0.5ug/ml)および2次抗体(HRP標識Goat anti-Rat, PIERCE #31470)を1/5,000に希釈した。このブロットをRestoreTM Stripping bufferでの室温で5分間の処理による抗体除去を行った(B)。　続いて1次抗体を1/5,000希釈、2次抗体を1/20,000希釈の条件で再プローブした。ブロッキングにはSuperBlock^® Blocking Buffer in PBS を使用した。
複数の第一抗体の使用複数の第一抗体をテストするために貴重なサンプルを浪費し、電気泳動を繰り返す必要はありません。Restore^TM Stripping Bufferで第一抗体と試薬を除去して下さい。第一抗体のアフィニティにもよりますが、５～１５分位で処理できます。除去後、次の第一抗体で再反応して下さい。図2は、SuperSignal^® Chemiluminescent Detection Systemで同じブロットを使って異なるタンパク質を分析することができることを示しています。

	図2。複数の第一抗体でのブロッティング HeLa細胞ライセート中のタンパク質(750ng～83.3ngで系列希釈)をウェスタンブロットに供して、SuperSignalRWest Dura Chemiluminescent Substrateで検出した。1回目のブロットは、Rabbit anti-Jack-1ポリクローナル抗体（BD Pharmingen）を1/2,000希釈、HRP標識2次抗体は1/350,000希釈で使用した。このブロットをRestoreTM Stripping Bufferによる室温15分間の処理により抗体除去、続いて1次抗体として1/1,000希釈したMouse anti-human BAK モノクローナル抗体、1/100,000希釈のHRP標識2次抗体を使用して再プローブした。ブロッキング剤として0.05％　TweenR-20入り5％ノンファットミルクを使用した。

Cat.#	製品名	Pkg.
21059	Restore^TM Western Blot Stripping Buffer （８cmｘ１０cmのミニゲル　２５枚分）	500ml
21062	Restore^TM Western Blot Stripping Buffer	30ml

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