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図1.SwellGelTMNickel Chelating Discsの高いバインディングキャパシティー
250mlのEscherichia Coli. BL21細胞内に発現させた組換え6xHis緑色蛍光タンパク質(GFP)をB-PER®II Bacterial Protein Extraction Reagent(#78260)の5mlを加え て抽出する。細胞残査を取り除いた後、溶解液100μlをニッケルSwellGel®Nickel Chelating Discsの入ったフィルタープレートのウェルまたは通常のニッケル-キレートアガロースゲルに加える。未反応タンパク質を低遠心分離(500g、3min.)により取り除き、250μlのリン酸バッファ−(50
mM Na3PO4, 300 mM NaCl, 80 mM imidazole, pH 7.6)で2回洗浄する。結合した6xHisタッグGFPは溶出バッファ−(50
mM Na3PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 7.6)100μlで溶出する。各ステップに於けるサンプルを回収して、4%-20%濃度勾配
SDS-PAGE にかける。
Panels A:100μlのサンプルで水和させたSwellGel®Nickel Chelating Discs
Panels B:平衡バッファーを除いた後、ニッケルキレートアガロースゲルに100 μlサンプルを添加したもの
Lanes M:BlueRanger® Molecular Weight Marker (#26681);1:flow-through;2-3:washes;4-6:elutions.
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