ラベル転移試薬によるタンパク質の相互作用検出が、 より簡単なキットになりました ラベル転移として知られる新規手法はタンパク質相互作用を発見するためのin vitro ツールとして既に強力な牽引力を発揮して、様々なタンパク質相互作用の研究にProFound Sulfo-SBED ビオチンラベル転移試薬を用いた論文1-20　が次々と発表されています。この手法をより簡単に使って頂くために、ラベル転移試薬と共に頻繁に使用される試薬を選び、組み合わせたアプリケーションキットです。 ●ラベル転移試薬Sulfo-SBED● ラベル転移用のフォトクロスリンカーです。分子内にNHSエステル、フェニルアジド、ビオチンを含み、反応後にS-S結合を還元することでビオチン標識のラベル転移が行えます。精製baitタンパク質のアミンに遮光下で反応(第1反応)させた後、透析やイオン交換カラムなどで過剰な試薬を除去、preyタンパク質とインキューベーション、UV照射により架橋化(第2反応)します。 架橋後のPPI複合体は還元条件でのSDS-PAGEサンプルバッファーボイル等でbaitとprey間のS-S結合は切り離されビオチン標識されたpreyタンパク質をウエスタンブロットで確認するか、ビオチン結合性タンパク質（アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、モノメリックアビジン）による精製を行うことが出来ます。 プルダウンアッセイ　　ファーウェスタン　　Co-IP　　ラベル転移(Mts-Atf) 特徴 Sulfo-SBED は４つの特徴を備えた、強力なタンパク質相互作用検出ツールです アミン特異的反応基 非特異的　光活性基 チオール開裂ジスルフィド結合 ビオチンハンドル ラベル転移とは？ ラベル転移はin viｖo 酵母2ハイブリッド法やin vitro での免疫共沈法やプルダウンアッセイ法とは異なる、in vitro で相互作用を発見・確認する技術です。     Figure 2. ラベル転移法には精製済みの "bait(餌)" タンパク質が必要になります。 まず、この餌タンパク質のアミン基がSulfo-SBED分子内のSulfo-NHS基を介して修飾されます。次に、この修飾された餌タンパク質は遮光下で精製された"prey(獲物)"タンパク質や細胞ライセートと共にインキュベートされます。この Prey: Bait間に相互作用があり修飾されたbaitタンパク質の近傍にpreyタンパク質が存在すれば、紫外線を照射することによりSulfo-SBED分子内のフェニルアジド基は活性化し、prey: bait複合体は共有結合的に架橋されます。また架橋された複合体は還元することでビオチン標識を転移したpreyタンパク質を分離することが出来ます。転移させたビオチンはSDS-PAGEのHRP標識ストレプトアビジン検出や、カラムでの精製に利用できます。 最適化について このキットは文献等で記述があり紹介されているラベル転移法のアプリケーションから主要な6つのコンポーネントを抽出してキットとして構成されていますが、全ての相互作用検出システムでの成功が保証されているわけではありません。生物学的系において生じる多くの相互作用は、親和力、安定性、補因子の要求性、量比などで異なります。従って相互作用の検出を成功させるためには、それぞれのシステムにおける最適化が必要になります。 アプリケーション Label transfer reaction using a purified bait protein with either a cell lysate or a putative purified prey protein Detection of the bait:prey complex using streptavidin-HRP by Western blot analysis Detection of the biotin-containing prey protein using streptavidin-HRP after reduction of the bait:prey complex by way of Western blot analysis 関連製品 PPI複合体やビオチン標識物の濃縮 20228 ImmunoPure Immobilized Monomeric Avidin Gel 5 ml 20227 ImmunoPure Immobilized Monomeric Avidin Kit kit 53146 UltraLink Immobilized Monomeric Avidin 5 ml 29129 ImmunoPure D-Biotin 1 g 29200 Immobilized NeutrAvidin Biotin-Binding Protein on Agarose 5 ml 53150 UltraLink Immobilized NeutrAvidin Biotin-Binding Protein 5 ml 53151 UltraLink Immobilized NeutrAvidin Plus Biotin-Binding Protein 5 ml 脱塩 89849 Protein Desalting Spin Columns 25/pkg 89862 Protein Desalting Spin Columns 50/pkg 化学発光検出 34080 SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate* 500 ml 34075 SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate* 100 ml 34095 SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate* 100 ml 発色基質 34012 1-Step CN 250 ml 34042 1-Step NBT/BCIP 250 ml ウェスタンブロッティング転写膜 88018 Nitrocellulose Membrane, 0.45 um 1 roll 88118 PVDF (polyvinylidene difluoride) 1 roll 21059 Restore Western Blot Stripping Buffer 500 ml X線フィルム関連 34090 CL-XPosure Film (5" x 7") 100 sheets 34091 CL-XPosure Film (8 "x 10") 100 sheets 21065 Erase-It Background Eliminator kit * SuperSignal Technology is protected by U.S. Patent # 6,432,662. * Sulfo-SBED Technology is protected by US Patent #s 532,379, 5,892,057 and 5,872,261. 参考文献 Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 33073 ProFound Sulfo-SBED Biotin Label Transfer Kit Western Blot Application #33034 Sulfo-SBED 8 x 1 mg #20291 No-Weigh DTT 48 tubes #69576 Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Units, Float, 10K MWCO 10 units #28372 BupH Phosphate Buffered Saline 40 pk #21126 Streptavidin, Horseradish Peroxidase Conjugated 1 mg Kit 33033 ProFound Label Transfer Sulfo SBED Western Blot Application 10 mg 33034 No-Weigh Sulfo-SBED Label Transfer Reagent 8 x 1 mg 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com