[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィック ProFound IP/ Co-IP

プルダウンアッセイ　　ファーウェスタン　ラベル転移(Sulfo-SBED)　

ラベル転移(Mts-Atf)

プルダウンアッセイ、ファーウェスタン、Co-IP、ラベル転移などによりin vitroでのタンパク質間の相互作用を検出するためのキットです。各キットに添付されている取扱説明書には推奨プロトコルが記載されていますが、実際の検出では各PPI複合体に特異的な条件の最適化も必要となります。ProFound^TMシリーズには、これらの手法で一般的に必要とされる試薬などがほぼ含まれており、また特別な機器を必要としないのも特徴です。

● 共沈降法(Co-IP) ●
HAタグとc-Mycタグは哺乳動物細胞での発現系において最もポピュラーなエピトープタグです。これらのタグは非常にポピュラーであるにも関わらず、これらのタグを使って免疫沈降（IP）や免疫共沈降（Co-IP）を簡単に行うためのキットが有りませんでした。サーモフィッシャーサイエンティフィック　ピアスブランドのProFound IP/Co-IP Kitsはタグ付きタンパク質の精製や、酵母2ハイブリッドにより示されたタンパク質間相互作用（PPI）の確認に必要な試薬・器具類を含んでいます。アガロース担体には高親和性・高特異性の抗体が予め固定化され、最低限の最適化を行うだけでCo-IPを行う事ができます。

特徴
● HAタグやc-Mycタグ付加タンパク質の免疫沈降（IP）や免疫共沈降（Co-IP）用のキット

IPやCo-IPアプリケーションでの使用が実証されており、キットにはアッセイに必要なコンポーネントが含まれているため、初心者の方からエキスパートの方まで安心して御使用頂けます。

● HAタグやc-Mycタグに対する高い親和性と優れた特異性の固定化モノクローナル抗体

固定化されているモノクローナル抗体は、適切なタグが付加されたタンパク質を特異的にかつ高収率で沈降させ、ウエスタンブロットでのクリーンな検出を可能にします。
タグ付加baitタンパク質を含む200ulの細胞ライセートに対して通常プロトコルでは6ulの抗HAゲル懸濁液(3ulのゲルで10ugの固定化抗体を含む)、もしくは10ulの抗c-Mycゲル懸濁液(5ulのゲルで5ugの固定化抗体を含む)を使用します(発現コンディションにも依存します。)
ライセート中の他のタンパク質との非特異的な結合を最小化できます。
抗体はゲルに共有結合的に固定され、溶出物への抗体や抗体フラグメントの夾雑を防止します。

● シンプル、柔軟、分かり易いプロトコル

プロテインAやGを使用しないため、非特異的な結合の減少や手順の簡素化が図れます。
使用する抗体量やライセート量を顧慮せずに、低発現のHA/c-Mycタグ付き目的タンパク質の単離を可能にする柔軟性のあるシステムです。
キット付属のミニスピンカラムが迅速なプロセスを可能にします。

● ミニスピンカラム

少量の試料を扱う際にミニスピンカラムが便利です。
より効率の良い洗浄が可能です。
ピペッティングによるレジンの損失も防げます



図 1. 固定化抗HA抗体と抗c-Myc抗体の比較：各ProFound^TM IP/Co-IPキットで使用されている固定化抗体ゲルの有効性を市場の他のキットと比較した。各免疫沈降は、同量の抗体(10ugの固定化HA抗体または 5μgの固定化c-Myc抗体)で行われ、同量のGST-HA または GST-c-Mycを含むライセート(50 μl)に対して行われた。

図 2.
バクテリアライセートからのGST-HAとGST-c-Mycの溶出オプションの有効性：
陽性コントロールライセートを使用した各キットによる免疫沈降の結果によりGST-HAとGST-c-Mycに関する溶出方法の選択性が示された。溶出には各キットに含まれているコンポーネントを使用した。
Elution #1: 溶出バッファー(pH2.8)を使用。
Elution #2: 非還元サンプルバッファー(X2)を使用。

＊Co-IPで目的タンパク質(prey)がpHに敏感で(抽出後の中性化を行っても)活性が失われる事が予想され、かつ活性が必要とされる場合、中性pHによる溶出バッファー(#21027 ImmunoPure Gentle Ag/Ab Elution Buffer)も御利用頂けます。

　：取扱説明書　　

　：MSDS(英語版)

Cat #

製　　品　　名

Pkg. Size

23610

ProFound^TM HA-Tag IP/Co-IP Kit
HA-Tagとして発現させたタンパク質を使って、25回分のIP/Co-IPアッセイ分。キットはHA-Tagポジティブコントロールライゼート#23263入り。

#23612 ProFound HA-Tag IP/Co-IP Application Set

Immobilized Anti-HA	150 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
Elution Buffer, pH 2.8	50 ml
ImmunoPure^® Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer(5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set

#23613 HA-Tagged Positive Control
Bacterial lysate containing over-expressed GST-HA

500 ul

Kit

23612

ProFound^TM HA-Tag IP/Co-IP Application Set
HA-Tagとして発現させたタンパク質を使って、25回分のIP/Co-IPアッセイ分。

Immobilized Anti-HA	150 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
ImmunoPure Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer (5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set

Set

23613

HA-Tagged^TM Positive Control
Mammalian lysate containing over-expressed GST-HA

500 ul

23615

ProFound^TM Mammalian HA-Tag IP/Co-IP Kit
HA-Tagとして発現させたタンパク質を使って、25回分のIP/Co-IPアッセイ分。キットはHA-Tagポジティブコントロールライゼート#23263入り。

#23617 ProFound Mammalian HA-Tag IP/Co-IP Application Set

Immobilized Anti-HA	150 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
Elution Buffer, pH 2.8	50 ml
ImmunoPure^® Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer(5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set
M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent	25 ml

#23613 HA-Tagged Positive Control
Bacterial lysate containing over-expressed GST-HA

500 ul

Kit

23617

ProFound^TM Mammalian HA-Tag IP/Co-IP Application Set

Immobilized Anti-HA	150 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
Elution Buffer, pH 2.8	50 ml
ImmunoPure^® Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer(5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set
M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent	25 ml

Set

23620

ProFound^TM c-Myc-Tag IP/Co-IP Kit
c-Myc tagとして発現させたタンパク質を使って、25回分のIP/Co-IPアッセイ分。キットはc-Myc tagポジティブコントロールライゼート#23633入り。

#23622 ProFound Mammalian c-Myc-Tag IP/Co-IP Application Set

Immobilized Anti-c-Myc	250 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
Elution Buffer, pH 2.8	50 ml
ImmunoPure^® Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer(5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set

#23633 c-Myc-Tagged Positive Control
Bacterial lysate containing over-expressed GST-c-Myc

500 ul

Kit

23625

ProFound^TM Mammalian c-Myc Tag IP/Co-IP Kit
c-Myc tagとして発現させたタンパク質を使って、25回分のIP/Co-IPアッセイ分。キットはc-Myc tagポジティブコントロールライゼート#23633入り。

#23627 ProFound Mammalian c-Myc-Tag IP/Co-IP Application Set

Immobilized Anti-c-Myc	250 ul
BupH Tris Buffered Saline Pack	1 pack
Elution Buffer, pH 2.8	50 ml
ImmunoPure^® Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer(5X)	5 ml
Handee Mini-Spin Columns Accessory Pack (フリット&キャップセット済み)	27 columns
Collection Tubes and Caps Accessory Pack (目盛り付き2mlチューブ)	100 Set
M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent	25 ml

#23633 c-Myc-Tagged Positive Control
Bacterial lysate containing over-expressed GST-c-Myc

500 ul

Kit

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