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Ready-to-use プロテアーゼ阻害剤カクテルの決定版
Halt Protease Inhibitor Cocktail
各マイクロチューブで10mlライゼートを保護、蛋白質分解活性をノックダウン
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PIERCEは従来のプロテアーゼ阻害カクテルに新要素「使い易さ」を添加しました。
Single-use Protein Inhibitor Cocktail は密閉された100 ulのマイクロチューブ×24本の梱包形態です。
1 mlの試料に対して10 ulの×100カクテル使用が推奨されておりチューブ1本あたり10 mlの細胞抽出物を保護します。×100カクテルはDMSOに溶解されており必要量を添加するだけでセリンプロテアーゼ・システインプロテアーゼ・カルパインプロテアーゼ・メタロプロテアーゼ等の広範囲な蛋白質分解酵素を阻害します。下流で二次元電気泳動を行う場合にはEDTAフリーなカクテルも選択可能です。
金属箔により密閉されたマイクロチューブはピペットチップの先端で簡単に貫通でき、のこりのチューブは大気・水分から遮断して、次ぎの使用までフレッシュな状態で保管できます。

本製品の組成および濃度は全て開示されています

プロテアーゼ阻害剤カクテルの使用者は実験の性質上その組成に関係する詳細を知る必要に迫られることがあります。多くの製造元では組成は企業秘密であり開示は行っていません。 本製品は使用者と情報を共有することを目的に特別に開発された製品です。

特徴
■　すぐに使える、使いきりサイズ
o 劣化やコンタミネーションも最小限、無駄のない使いきりサイズ
o 融解・溶解を待たず、いつでもフレッシュなカクテルが使用可能
■　組成や濃度は全て公開
o EDTA入り/EDTAフリーから選択
o 各成分は別途購入可能（特定のプロテアーゼ阻害剤クラスの濃度を上昇させ、目的蛋白質の安定性・回収率を高めた独自カクテルも調製可能）
■　POPPERS細胞可溶化バッファーに対応
o 界面活性剤ベースのPOPPERS（細胞溶解に酵素を使用していません）で効果的
o 培養細胞用M-PER・バクテリア用B-PER・組織用T-PER・酵母用Y-PERで顕著な効果を確認
■　4℃冷蔵で安定的に保存
o 冷凍庫の貴重なスペースを確保
o 融解を待たず、すぐに使用可能

用途
  • インタクトで活性のある細胞内蛋白質を内在性プロテアーゼによる分解から保護
  • 様々な方法により調製された細胞ライゼートでのプロテアーゼ活性の阻害（PIERCE POPPER細胞可溶化バッファーを含む市販の細胞・組織可溶化製品、超音波破砕、フレンチプレス、ホモジナイザー、凍結融解法）
  • EDTAにより活性に影響を受ける蛋白質やIMAC精製する場合にはEDTAフリーを使用
  • 蛋白質分解活性用の抽出物のスクリーニング
  • 細胞内プロセスの制御における蛋白質分解の研究

Halt Protease Inhibitor Figure 1 図 1. SDS-PAGE上でのHaltプロテアーゼ阻害剤カクテルの蛋白質分解活性阻害効果の確認
ウシ血清アルブミン (BSA) をパパイン存在下で一晩37℃インキュベーションした。
Lane 1 プロテアーゼ阻害剤を添加せずBSAを消化
Lane 2 Halt Protease Inhibitor Cocktail存在下でBSAを消化.
Lane 3 Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free存在下でBSAを消化
Effectiveness of Pierce Single-use Cocktail vs. Popular Tablets
Comparison of single-use cocktails and tablets. Single use cocktails are ~40% more effective in shutting down proteolytic activity in a rat pancreatic extract
図 2: Halt single-useカクテルと市販錠剤カクテルの比較
Halt Protease Inhibitor Single-use Cocktail (EDTA存在/不在)と市販の錠剤カクテルを添加した1.0 mg/mlラット膵臓抽出物を一般的なプロテアーゼアッセイの同条件で比較した。Pierce single-use cocktails では 97% 以上阻害、対して錠剤は 59% 以上の阻害となった。

表 1. Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail 組成
阻害剤 M.W. 阻害標的 阻害タイプ 溶解度(溶媒) カクテルの濃度
(100X in DMSO)
AEBSF-HCl 239.5 セリンプロテアーゼ 不可逆的 200 mg/ml (H2O) 100 mM
Aprotinin 6511.5 セリンプロテアーゼ 可逆的 10 mg/ml (H2O) 80 ?M
Bestatin 308.38 アミノペプチダーゼ 不可逆的 5 mg/ml (MeOH) 5 mM
E-64 357.4 システインプロテアーゼ 不可逆的 20 mg/ml
(1:1 EtOH /H2O)		 1.5 mM
EDTA
(#78430)		 372.24 メタロプロテアーゼ
(2価カチオンをキレート)		 可逆的 10 g/100 ml(H2O) 0.5M(#78430)
Leupeptin 475.6 セリン/システインプロテアーゼ 可逆的 1 mg/ml (H2O) 2 mM
Pepstatin A 685.9 アスパラギン酸プロテアーゼ 可逆的 1 mg/ml (MeOH) 1 mM


細胞可溶化試薬POPPERSとの共存性
B-PER Bacterial Protein
Extraction Reagent		 M-PER Mammalian Protein
Extraction Reagent
Protease inhibition results in presence of B-PER Protein Extraction Reagent Protease inhibition results in presence of M-PER Protein Extraction Reagent
     1       2       3       4      1       2       3       4
図 3: B-PERおよびM-PER存在下でのPierce Protease Inhibitor Single-Use Cocktails
alt Protease Inhibitor Single-Use Cocktailのプロテアーゼ活性阻害をSDS-PAGEで確認するため、ウシ血清アルブミン(BSA)を0.1 mg/ml Trypsin in M-PER または0.1 mg/ml Trypsin in B-PER存在下37℃で一晩放置した。
Lane 1: コントロール1; BSA only
Lane 2: コントロール2; Trypsin (0.1 mg/ml) (+) BSA. No Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail present.
Lane 3: BSA (+) Trypsin with Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail with EDTA.
Lane 4: BSA (+) Trypsin with Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail, EDTA-free.

Under the extreme conditions of time and temperature, substantial protection from degradation was observed as marginal to barely detectable cleavage products of BSA.

References to Applications of Protease Inhibitor Cocktails
  • Kulakowska-Bodzon, A. et al. (2006). Methods for samples preparation in proteomic research. J. Chrom. B (doi:10.1016/j.jchromb.2006.10.040).
  • North, M.J. (1989). Prevention of unwanted proteolysis in Proteolytic Enzymes: A Practical Approach (Beynon, R.J., Bond, J.S. eds), pp. 105-124, IRL Press, Oxford.
  • Salvensen, G. and Nagase, H. (1989). Inhibition of proteolytic enzymes in Proteolytic Enzymes: A Practical Approach (Beynon, R.J., Bond, J.S. eds). pp. 83-104, IRL Press, Oxford
Related Products
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B-PER Protein Extraction Reagents
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Technical Tips
Remove detergent from protein samples(Tech Tip #19)
Protein stability and storage(Tech Tip #43)
Convert between times gravity (x g) and centrifuge rotor speed (RPM)(Tech Tip #40)
Calculate reagent log P values to determine solubility characteristics

　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版)
Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size
78430 Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail (100X)
Each 100 μl microtube contains sufficient cocktail to treat 10 ml of lysate. Protease inhibitors prepared in DMSO solution.
Protease Inhibitor Cocktail, 100 ul microtubes 24
0.5 M EDTA Solution 2.5 ml
24x100ul
78425 Halt Protease Inhibitor Single-Use Cocktail, EDTA-free (100X)
Each 100 ul microtube contains sufficient cocktail to treat 10 ml of lysate. Protease inhibitors prepared in DMSO solution.
Protease Inhibitor Cocktail, 100 il microtubes 24
24x100ul
78431 AEBSF
(4-[2-aminoethyl]benzenesulfonyl fluorideHCl)		 100 mg
78432 Aprotinin 25 mg
78433 Bestatin 10 mg
78434 E-64
(N-trans-epoxysuccinyl-L-leucine-4-guanidinobutylamide)		 10 mg
78435 Leupeptin
([acetyl-leucyl-leucyl-argininal]hemisulfate)		 50 mg
78436 Pepstatin A 25 mg


関連製品
Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size
78410 Halt Protease Inhibitor Cocktail Kit
Sufficient to treat 200 ml of sample.
Sufficient to treat 200 ml of sample. 2 ml, 100X
0.5 M EDTA Solution 2.5 ml
Kit
78415 Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-FreeSufficient reagents for 100 ml of extract 1 ml


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