ノーザン、サザンブロットでの核酸の化学発光検出 時間を追う毎に強くなる発光と ガラスの様に透明なバックグラウンド 　#89880 Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module North2South、LightShift(#20148)、SuperSignal RPA III(#89832)に含まれている化学発光モジュールの補充用製品です。 ノーザンブロットから分かるNorth2SouthTM Chemiluminescent Detection Systemのバックグラウンドの低さ しっかりしたシステム ・ キット添付のプロトコール中、ハイブリダイゼーションとブロッキングステップは経験を重ねて最適化されています ３２Ｐ相当の感度 ・ ピアスの新しいＨＲＰ用のルミノール基質は３２Ｐ相当の感度を誇る非放射性検出システムです ハイブリダイゼーション後の処理時間はわずか６０分 ・ ＤＩＧ検出の標準的なシステムはさらに１５０％以上もの処理時間がかかります フィルムへの現像時間は３０−６００秒 ・標準的なＤＩＧ検出システムだと、0.5〜４時間かかります ６時間の間に何度でも現像ができます 低バックグラウンドでシグナルくっきり ・周りのバックグラウンドが低いので、シグナルが集中 ＳＮ比のばらつきは最小限・ バックグラウンドノイズは長い現像時間をおいても低いレベルのまま保たれ、さらに化学発光試薬のシグナルは強くなっていきます。 ビオチン標識ＲＮＡプローブ Figure 1A: Competitor B's DIG System Figure 1B: Pierce North2South™ Figure 1C: 32P Exposure Time 5 min. 25 min. 5 min. 25 min. 72 hrs. 一連の希釈した酵母RNAのノーザンブロット（5μg、2.5μg、0.625μg、0.313μg、0.156μg）は、発現させたTMC1遺伝子を測定したものです。(A)と(B)ではDIG標識したTMC1 cRNAプローブをハイブリダイズさせ、検出したものです。(C)と(D)はビオチン標識TMC1 cRNAをハイブリダイズさせ、サーモフィッシャーサイエンティフィック　ピアスブランドのNorth2SouthTM化学発光検出システムで検出しました。(E)は３２Ｐ標識のTMC1 cRNAプローブをハイブリダイズし検出した物です。各フィルムの露光時間は(A)＝５分、(B)＝２５分、(C)＝５分、(D)＝２５分、(E)＝７２時間です。いずれも増感紙は使用していません。 多くのベクターにはクローン化ＤＮＡテンプレートからの転写ＲＮＡ生成をさせるためのファージプロモーターを含んでいます。ＳＰ６，Ｔ７、Ｔ３ファージポリメラーゼなどはin vitroでの転写で一般的に広く使われています。ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドはＤＮＡ：ＤＮＡハイブリッドよりも安定なので、標識した転写ＲＮＡはハイブリダイゼーションにおいてはＤＮＡを用いるよりも優れた感度を得ることができ、ます。また、転写ＲＮＡは一本鎖で、使用前に変性させる必要がないのでハイブリダイゼーションの収率をだ妥協せずにすみます。North2SouthTM Biotin in vitro Transcription kitはサザンやノーザンブロット、ハイブリダイゼーションにおけるプローブの為の高い活性をもったＲＮＡのビオチン標識ができます。反応後のハイブリッドはストレプトアビジン−ＨＲＰ（Horseradish peroxisase）で検出する事ができます。 ビオチン標識ＤＮＡプローブ North2SouthTM Random Prime DNA Labeling Kit は、FeinbergとVogelstein4,5らの技術に基づいた製品です。考えられる配列を全て含んだランダムヘプタヌクレオチドを熱処理して変性したＤ鋳型ＮＡにアニールします。これらはＤＮＡポリメラーゼ（Klenow fragment, 3'-5' exo-)によって相補する鎖の合成する為のプライマーとなります。反応溶液中のビオチン標識したｄＮＴＰｓは新しく合成されたＤＮＡに取り込まれます。この方法でビオチン標識されたＤＮＡはサザンやノーザンのハイブリダイゼーションを行う時にプローブとして高い活性を持たせることができます。反応後の、ハイブリッドはストレプトアビジン−ＨＲＰで検出する事ができます。 プラークの検出 遺伝子配列が既知のＧＦＰに対するビオチン標識ＤＮＡプローブをNorth2SouthTM 化学発光検出システムを使って、出現したプラークにハイブリダイズしたもの。フィルムへの露光時間は１分間。 References 1. Hrsch, J. and Henry, S.(1986). Expression of the Saccharomyces cerevisiaeinositol-1-phosphatase synthase (IN01) gene is regulated by factors that affect phospholipid synthesis. Mol. Cell. Biol. 6, 3320-3328. 2. Hoffman, C. and Winston, F. (1987). A ten-minute DNA Preparation from yeast efficiently releases autonomous plasmids for transformation of Escherichia coli. Gene 57, 267-272. 3. Sakbrook, J.k., Fritsch, E. and Maniatis, T. (eds.) Molecular Cloning, Second Edition (1989). Cold Spring Harvor Press. Plainbviewm New Yoak. (Product #17946) 4. Feinberg, A.P. and Vogelsteinm B. (1983). Anal. Biochem. 132, 6. 5. Feinberg, A.P. and Vogelsteinm B. (1983). Anal. Biochem. 137,266 Cat. # 製品名 容量 17097 North2South™ Chemiluminescent Hybridization and Detection Kit Sufficient reagents for ten 10 x 10 cm membranes. Hybridization Buffer 125 ml 2X Stringency Wash Buffer 375 ml Blocker Buffer 500 ml 4X Wash Buffer 500 ml Substrate Equilibration Buffer 500 ml Stabilized Streptavidin-HRP Conjugate 1.5 ml Luminol/Enhancer Solution 80 ml Stable Peroxide Solution 80 ml Kit 17095 代替 →17097 削除 05/5/18 North2South™ Chemiluminescent Hybridization and Detection Kit Kit 17075 North2South™ Biotin Random Prime DNA Labeling Kit Sufficient reagents for ten reactions** 5X Heptanucleotide Mix 5X Deoxynucleotide Mix 10X Reaction Buffer Klenow DNA Polymerase Control DNA 5M Ammonium Acetate 0.5M EDTA Nuclease-free Water 0.5 M EDTA Kit *Each reaction yields probe sufficient for approximately thirty 10 x 10 cm blots. **Each reaction yields probe sufficient for approximately three 10 x 10 cm blots. 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com