[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィック DyLight 蛍光標識＆精製スピンカラムキット

DyLight蛍光色素を使用した抗体への迅速な標識と効率的な精製を目的とするキットです。400nmから770nmまでの9種類の色素、2種類の標識反応スケールから選択することが可能です。Antibody Labeling Kitには1 mgのIgG (または同等量の蛋白質)の3回分の標識および精製に充分な試薬、Microscale Antibody Labeling Kitには100 ugのIgG抗体(または同等量の蛋白質)の5回分の標識および精製に充分な試薬が含まれます。。

キットの特徴:

標識および精製は約1時間で完了
NHSエステルによるアミン特異的で安定な共有結合による蛍光標識
理想的な抗体活性と蛍光活性のdye:protein比に至適化された標識プロトコル
量済みのSingle-UseフォーマットのDyLight蛍光標識試薬
スピンカラムにより未反応色素は迅速かつ効率的に除去（低い蛍光バックグランドノイズ）

DyLight蛍光色素の特徴：

高い蛍光強度（少量の蛍光標識物で高感度な検出が可能）
シャープな蛍光スペクトル（マルチカラー検出での蛍光チャンネル間のブリードが小さい）
優れたフォトスタビリティ（退色耐性が高くstructured illumination, 4Pi microscopyなどの最も過酷な条件を要求される蛍光イメージングにも対応）
蛍光標識物は pH 4-9 で安定
励起蛍光波長は一般的な蛍光機器のフィルターセットおよびレーザーセッティングに対応

Dye Removalカラムの特徴:

未反応の蛍光試薬を効果的に除去（使用時のノイズを軽減）
最小限の抗体希釈
面倒な調整も不要、迅速なスピンカラム

表 1. DyLightの蛍光スペクトル

Emission	Fluor	Ex/Em^†	See Spectra	e^††	Spectrally Similar Dyes
Blue	DyLight 405	400/420		30K	Alexa 405, Cascade Blue
Green	DyLight 488	493/518		70K	Alexa 488, fluorescein, FITC
Yellow	DyLight 549	550/568		150K	Alexa 546, Alexa 555, Cy3,TRITC
Red	DyLight 594	593/618		80K	Alexa 594, Texas Red
Red	DyLight 633	638/658		170K	Alexa 633
Red	DyLight 649	646/674		250K	Alexa 647, Cy5
Near IR	DyLight 680	682/715		140K	Alexa 680, Cy5.5
Near IR	DyLight 750	752/778		210K	Alexa 750
Infrared	DyLight 800	770/794		270K	IRDye* 800

†最大励起波長(nm)および最大蛍光波長(nm)
††モル吸光係数 (M^-1 cm^-1)

DyLight蛍光色素シリーズ：
DyLight蛍光色素は高い蛍光強度に加えて、高いフォトスタビリティ(退色耐久性)、pH安定性、シャープなスペクトルが特徴です。特に蛍光顕微鏡を使用したStructured illuminationなどの最新の画像化技術では、3次元立体再構成像の作成のために免疫蛍光染色された細胞などの試料は数百回ものスキャンを受けるので、高い退色耐久性と蛍光強度が要求されます。
DyLightの高い光安定性は、最新の蛍光イメージング技術でも実証済みです。

3D structured illumination of HeLa Cell using Thermo Scientific DyLight 633 Dye.

図1. DyLight 633 による HeLa細胞 3D Structured Illuminatin 像
3次元立体再構成は Structured Illumination 収集パラメーターにより得られた70光学切片(～8 um)から行われた。イメージは AxioVision (Zeiss MicroImaging, Inc) による最大投影を行うため圧縮、好ましい投影角度に変更した。210回のスキャンにより収集された70の光学切片でDyLight 633は試料全体に渡って蛍光強度を維持していた。画像編集（コントラスト、明るさ、ガンマ補正）は行っていない。DyLight 633標識物の特異性と強度が判る。赤: anti-tubulin モノクローナル抗体および DyLight 633 標識2次抗体(highly cross-adsorbed) により Alpha tubulin を検出。青: DAPIによる核のカウンター染色。

3D reconstruction of HeLa cells in double fluorescence using Thermo Scientific DyLight 488 and DyLight 633 Dyes.

図2. DyLight488と633によるHeLa細胞の二重蛍光染色の3次元立体再構成像
画像全域に渡る均一な蛍光強度かDyLight488と633の輝度と安定性が示された。Structured illumination により56光学切片（～7um）が収集され、AxioVision Software によりHeLa細胞3次元立体再構成像を作成した。レンダリング前の画像編集（コントラスト、明るさ、ガンマ補正）は今回行っていない。緑: anti-tubulin モノクローナル1次抗体および DyLight 488 標識2次抗体(highly cross-adsorbed) によりAlpha tubulinを検出。赤: anti-Hsp60 ポリクローナル抗体および DyLight 633 標識2次抗体によりHsp60を検出。青: DAPIによる核のカウンター染色。

標識抗体の回収率:
キットには独自のレジンを使用した高性能スピンカラムが含まれ、未反応の蛍光試薬を効率的に除去、かつ高い回収率で抗体を精製します(図3)。

DyLight Antibody Labeling Kits provide outstanding recovery.

図3. DyLight Antibody Labeling Kit の回収率
DyLight Antibody Labeling Kits の回収率(%)は3種類の異なる抗体を使用した標識反応16回の平均から、DyLight Microscale Antibody Labeling Kitの回収率(%)は3種類の異なる抗体を使用した標識反応13回(n=13)の平均から求めた。

図4. 操作概要

STEP1　抗体溶液を(DyLight試薬を含む) チューブに直接添加、 60分間インキュベート	STEP2　スピンカラムに添加、 30秒間の遠心により未反応の蛍光試薬を除去、抗体を回収

Cat.#

製品名

Pkg.

53020

DyLight 405 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 405 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53021

DyLight 405 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 405 NHS Ester	5 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53024

DyLight 488 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 488 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53025

DyLight 488 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 488 NHS Ester	5 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53034

DyLight 549 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 549 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

Kit

53035

DyLight 549 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 549 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

Kit

53044

DyLight 594 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 594 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53045

DyLight 594 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 549 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

53046

DyLight 633 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 633 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53047

DyLight 633 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 633 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

53050

DyLight 649 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 649 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

Kit

53051

DyLight 649 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 649 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

Kit

53056

DyLight 680 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 680 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

Kit

53057

DyLight 680 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 680 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

Kit

53058

DyLight 750 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 750 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

53059

DyLight 750 Microscale Antibody Labeling Kit

5 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 750 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

53062

DyLight 800 Antibody Labeling Kit

3 x 1 mg の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 800 NHS Ester	3 vials
Reaction buffer	1 ml
Spin columns	6 each
Microcentrifuge collection tubes	12 each
Purification resin	5 ml

Kit

53063

DyLight 800 Microscale Antibody Labeling Kit

15 x 100 ug の IgG抗体（その他蛋白質では同等量）の標識および精製に充分な試薬を含む
DyLight 800 NHS Ester	5 vials
Borate buffer	1 ml
Spin columns	5 each
Microcentrifuge collection tubes	10 each
Purification resin	5 ml

Kit

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