[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィック 660nm総タンパク質アッセイ

還元剤・界面活性剤・ Laemmli Sample Buffer (+BPB)も共存可能な総タンパク定量

Thermo Scientific Pierce 660 nm Protein Assayは色素結合法をベースにした迅速かつ線型性の高いシンプルな1液タイプの総タンパク質定量法です。色素がタンパク質と結合すると赤色から緑色に呈色して660nmを吸収極大とする吸光スペクトルの変化が生じます。タンパク質を用いるアプリケーションで一般的に使用される塩還元剤・界面活性剤に対して、高い共存性(表1)を示します。さらに従来のブラッドフォード法では見られなかった高い線形性(図1)も特徴です。
特徴 5分間のインキュベーション 1液タイプ、室温保管高い線型性 (図1) ほとんどの界面活性剤・還元剤・SDSサンプルバッファー(BPB入り)に対応マイクロプレート法では10ul, 試験管法では100ulの試料を使用
	図1. Pierce 660 nm Protein Assay と Quick Start Bradford Protein Assay の線型性比較 100 ul BSA 標準品を使用して、試験管法により評価した。Pierce 660 nm Protein Assay (青)では 25-2,000 μg/ml の範囲で高い線型性を示した。Bradford Assay (赤)は 125-1,000 μg/ml で線形性を示した。
特徴還元剤も界面活性剤も含む試料の総タンパク質の定量迅速、かつ正確なタンパク量の評価反応原理は? 色素-金属-複合体(非公開)の酸性溶液中でのタンパク結合による、複合体の赤から緑への変色を利用しています。変色により吸収スペクトルが変化して660nmに吸収を持ちます。色素は主にタンパク質のヒスチジン・アルギニン・リシンなどの塩基性アミノ酸に結合、またチロシン・トリプトファン・フェニルアラニンにも(弱く)結合します。

図2. ウシ血清アルブミンへの結合による色素-金属複合体の吸収スペクトルの変化 340から800nmにおけるPierce 660 nm Protein Assay Reagentの吸収スペクトルの測定をVarian Cary spectrophotometerを使用して行った。試薬は成分非公開の色素-金属複合体で、酸性条件下でタンパク質に結合、吸収極大がシフトする。
パネル　Ａ	パネル　Ｂ
図3 および図 4 試験管法およびマイクロプレート法での典型的な吸収曲線パネルA, 試験管法: ウシ血清アルブミン 25-2,000 μg/ml およびウシガンマグロブリン 50-2,000 μg/ml の検出における線型領域を示した。各複製標準品の平均吸光値からは複製ブランク(control)の平均吸光値を差し引いた。パネルB, マイクロプレート法: ウシ血清アルブミン 50-2,000 μg/ml およびウシガンマグロブリン 50-2,000 μg/ml の検出における線型領域を示した。各複製標準品の平均吸光値から複製ブランク(control)の平均吸光値を差し引いた。
References: Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54. Gornall, A.G. (1949). Determination of serum proteins by means of the biuret reaction. J. Biol. Chem. 177:751-66. Lowry, O.H. (1951). Protein measurement with Folin-Phenol reagent. J. Biol. Chem. 193:265-75. Smith, P.K., et al. (1985). Measurement of protein using bicinchonninic acid. Anal. Biochem. 150:76-85. Stoscheck, C.M. (1987). Protein assay sensitive at nanogram levels. Anal. Biochem. 160:301-5. 表1. 共存可能物質濃度表2. タンパク間の呈色偏差 (Protein-to-protein variation) 表3 総タンパク定量法でのタンパク間の呈色偏差 (Protein-to-protein variation) Pierce 660 nm Protein Assay FAQ
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製　　品　　名

Pkg. Size

22660

Pierce 660 nm Protein Assay Reagent

試験管法 500 回分、マイクロプレート法 5,000 回分に充分な試薬を含む

750 ml

22662

Pierce 660 nm Protein Assay Kit

試験管法 300 回分、マイクロプレート法 3,000 回分に充分な試薬を含む
Pierce 660 nm Protein Assay Reagent	450 ml
Pre-Diluted Protein Assay Standards ,125- 2,000 μg/ml Bovine Serum Albumin (BSA) Set	3.5 ml, each

Kit

22663

Ionic Detergent Compatibility Reagent

5 x 1 g

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