[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィック Krypton Stain

SDS-PAGEゲルや2次元電気泳動ゲルでタンパク質を検出するゲル蛍光染色試薬です。独自の組成により、一般的な蛍光染色で要求される染色時間を大幅に削減します (図 1, 2)。他の蛍光染色試薬と同等以上の感度が得られ、ゲル蛍光染色で生じる定量性の問題（タンパク間の染色強度のバラツキ）を最小限に抑えます (図 3, 4)。Krypton では異なるタンパク質間でも線型性の高い定量域（ダイナミックレンジ：3～4オーダー）と高いシグナル強度が得られ、微量タンパク質の検出にも最適です(図4, 5)。

特徴
	迅速	30分でバンドあたり 2 ng のタンパクを検出 (Rapid Protocolでの染色)

	高感度	検出限界はバンドあたり 0.25 ng タンパク
	再現性	翻訳後修飾を受けたタンパク質や様々なサイズのタンパク質の染色でも線型性の高い応答
	励起/蛍光 520/580 nm	一般的な機器およびフィルターに対応（レーザースキャナーが最適ですがフィルターCCDカメラも効果的です。）
	多用途	質量分析やシーケンスに対応
	線型性・定量性	正確かつ再現性の高い応答と線型性の高い定量域 (3～4オーダーの広いダイナミックレンジ)

図 1. Krypton Protein Stain の染色時間と感度
各タンパクは 4-20% Tris-glycine ゲルにより分離され、製品プロトコルに従い染色された。染色ゲルは Typhoon* 9410 (532 nm 励起、580 BP30 蛍光フィルター)により検出および視覚化された。染色に180分間を要する Basic Protocol では低濃度レーンでもバンドが確認された。

図 2. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色製品との染色時間の比較

図 3. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色製品との2Dゲルでの感度比較_1

図 3. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色製品との2Dゲルでの感度比_2

図 3. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色製品との2Dゲルでの感度比較
HeLa 細胞からのタンパク抽出物 (28 μg) を pH 5-8 IPG strip により等電点電気泳動に供し、続いて 4-20% SDS-PAGE により分離した。ゲルは製造元が推奨する Basic Protocol により染色され視覚化された。

図 4. Krypton Protein Stain による染色での線型的な応答とタンパク間の染色比較_1

図 4. Krypton Protein Stain による染色での線型的な応答とタンパク間の染色比較_2

図 4. Krypton Protein Stain による染色での線型的な応答とタンパク間の染色比較
相対蛍光強度をプロット、様々なサイズのタンパク質と翻訳後修飾を受けたタンパク質のタンパク定量を試みた。

図 5. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色によるタンパク定量での線形性の比較_1

図 5. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色によるタンパク定量での線形性の比較_2

図 5. Krypton Protein Stain と他社ゲル蛍光染色によるタンパク定量での線形性の比較
タンパク濃度に対する相対蛍光強度は、4-20% Tris-glycine および Precise* Gelsで分離された9種の異なるタンパク質からの平均から求めた。エラーバーは3枚のゲルでの標準偏差を示す。製造元 Basic Protocol に従いゲルは染色され視覚化された。

* U.S. Patent Pending on Krypton Protein Stain Technology

Krypton Protein Stain is a trademark of Pierce Biotechnology, Inc.
Deep Purple Total Protein Stain is a trademark Amersham Biosciences
Flamingo Fluorescent Gel Stain is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
SYPRO Ruby Protein Gel Stain is a registered trademark of Molecular Probes, Inc.

質量分析について
サーモフィッシャーサイエンティフィック　ピアスブランドではKypton染色したBSAおよびミオグロビンに関して #89871 In-Gel Tryptic Digestion Kit によるゲル内トリプシン消化とMALDIによる質量分析から、PMF法での特徴的なプロフィールを得ています。#89871 では脱染液は重炭酸アンモニウムとアセトニトリルおよび純水が使用され、色素結合を示すピークのシフトは見られませんでした。（データ未公開）