透析膜：再生セルロース プラスチック部：低タンパク吸着/低核酸吸着性のポリエチレンコポリマー 透析膜からの残留物質除去 グリセロール - 1Lの純水に対して15分間の透析(グリセロール含有量: <3% in 3K, 〜15% in 7K and 〜23% in 10K MINI) 金属類 - 1 mM EDTAを含む1Lの溶液に対して15分間の透析( 3K, 7K, 10K MINI での金属含有量;2 ppb 不明イオン, 5 ppb マグネシウム, 1.5 ppb ニッケル, 0.2 ppb 亜鉛, 0.2 ppb 銅, 0.5 ppb クロム, 0.3 ppb カルシウム)

MINIの製造工程： SAL MINI は製造過程および梱包過程で作業者に接触されず、自動的に袋詰されます。 製造はHEPA クリーンルーム環境下で行われます。 滅菌のための追加操作（オプション）: ガンマ線照射 煮沸: 15 min. (14% 透析速度) オートクレーブ: 15 min. @ 121°C @ 15 psig (25% 透析速度; オートクレーブによってはダメージを受けることがあるため、損傷の有無をチェックして下さい。 70% Ethanol 30% Hydrogen Peroxide 1,500 ppm Peracetic Acid: 5-15 minutes 1N NaOH (1N NaOH は膜孔を縮める可能性があります)

SAL MINI (0.01-0.1 ml) 0.3 ul/mm2 SAL (0.1-0.5 ml) 0.4 ul/mm2 SAL (0.5-3 ml) 0.3 ul/mm2 SAL (3-12 ml) 0.5 ul/mm2 SAL (3-15 ml) 0.9 ul/mm2 Resin (0.5 ml/5 ml) 0.1 ul/mm3 Micro filtration (100 ul) 0.05 ul/mm2

Reagent   Reagent Acetic Acid, 25% G   Hydrofluoric Acid, 25% F Acetone G   Hydrogen peroxide, 30% G Ammonium hydroxide, 1N F   Isopropanol G Reagent F   Methanol, 98% G Amyl acetate G   Methyl acetate G Benzene N   Methyl ethyl ketone G Benzyl alcohol N   Methylene chloride G Butanol G   Nitric Acid, 25% N Butyl acetate G   Nitric Acid, 65% N Carbon tetrachloride G   Perchloric Acid, 25% N Chloroform N   Phosphoric Acid, 25% F Dimethyl formamide F   Potassium hydroxide, 1N N Dioxane G   Propylene glycol G Ethanol, 70% G   Sodium hydroxide, 1N F Ethanol, 98% G   Sulfuric Acid, 25% F Ethyl acetate G   Sulfuric Acid, 96% N Ethylene glycol G   Tetrahydrofuran G Formaldehyde solution, 30% G   Toluene G Formic Acid, 100% G   Trichloroacetic Acid, 10% F Formic Acid, 25% G   Trichloroacetic Acid, 25% N Hexane G   Trichloroethylene N Hydrochloric Acid, 25% N   Xylene F Hydrochloric Acid, 30% N   G= Good chemical resistance F= Fair chemical resistance (pore swelling may occur in membrane or polypropylene may be effected by short-term exposure N= Not recommended

anionic CHO 430 4300 + - + - - - + - 1.4x10-2 DOC 432 4200 + - +   5%, 0.04% - + + 5x10-3 SDS 288 18000 + + + - 5%, 0.02% - + + 8.3x10-3 cationic            C16-TAB 365 62000 + + +   - - - + 1x10-3 Zwiterionic CHAPS 615 6150 + - - - 5%, 5% - -   4x10-3 CHAPSO 631 6940 + - - - 5%, 5% - -   8x10-3 LYS 495 92000 - +/- - - - - - - 7x10-6 ZWI 364 30000 +/- +/- - - 1%, 0.03% - - - 3x10-4 Non-Ionic Brij 35 1225 49000         5%, 0.06%       9x10-5 Brij 58 1120 82000         1%, 0.02%       7.7x10-5 LUB 582 64000 - - - - 1%, 0.03% + +/- - 1x10-4 NP40 603 90000 - - - + 5%, 0.05% + +/- - 3x10-4 Triton X100 647 90000 - - - + 5%, 0.06% + +/-   0.2x10-3 Triton X114 515   - - - + 1%, 0.06% + +/-   0.2x10-3 OGL 292 8000 + - -   5%, 0.5%   -   14.5x10-3 OTG 308           5%, 3%       9x10-3 Tween-80 1310 76000 - - - - 5%, 0.02% + +/-   1.2x10-5 Tween-20 1228   - - - - 5%, 0.03% + +/-   6.0x10-5 * 界面活性剤濃度 (%) はBCATMとCoomassie PLUSで阻害が見られる濃度 　＋：透析可能、−：透析不可 　Reference: Jones, et al, 1987 CMC (臨界ミセル濃度) は界面活性剤のミセル形成が開始する最低濃度を示す CMC は非イオン性界面活性剤の透析性に影響を与える イオン性電荷を持たない界面活性剤では、高CMCは速やかに透析されるが、ミセルを形成する低CMは透析速度が遅い 界面活性剤のCMCはpH, 温度, イオン強度, 不純物などにより変わる 非イオン性界面活性剤のCMCは温度と共に上昇するが、イオン性界面活性剤は温度の上昇に伴いCMCが減少する

タンパク質: 　試料を グリシン（pH 2.8）, PBS (pH 7.2), 重炭酸ナトリウム (pH 9.2) バッファーにより0.01 mg/ml と 0.1 mg/ml に希釈した。各タンパク質溶液 50 μl を 10K MINI 透析ユニットに添加、オーバーナイトで PBS, pH 7.2に対して透析を行った。回収された試料 (〜50 μl) をマイクロプレートに添加して100 μl Micro BCATM Protein Assay Reagentと混合した。 試料 pI M.W. (kD) A(280) 1 mg/ml その他 Aldolase 99% * 6.1 150 0.94 7-28 sulfhydryls Avidin 94% * 10 67 1.5 79.6 x 83.4 x 79.6 Å Biotin-BSA 95% 4.7 67 0.68 biotinylated BSA 96% 4.7 67 0.68 - Cationized BSA 94% 11 67 0.68 high amine content Chymotrypsinogen A 96% - 25 - - CIAP 97% 4.4 140 0.99 - Cytochrome C (equine) 98% 9 12.4 - 25 x 25 x 37 Å Goat anti-Mouse IgG 95% 7-8 150 1.4 - Histone type IIIS 91% * - 12-20 - high amine content HRP 98% 8 40 0.6 - Lysozyme (hen) 93% * 11 14.4 2.6 45 x 30 x 30 Å Mouse IgG 99% 7-8 150 1.4 - Myglobin 95% 6.8 16.9 1.7 44 x 44 x 25 Å NeutrAvidinTM 98% 6.3 60 - - Ribonuclease A (bovine) 94% 9.5 13.7 0.73 38 x 28 x 22 Å Streptavidin 95% 5 60 - 98.4 x 98.4 x 125.8 Å SBP 97% 4.1 40 0.6 - Phosvitin 96% - 40 - 10% phosphorylation Casein 98% * 4.7 16 & 23.6 - 1% phos, high carboxy *Avidin, Lysozyme は0.01mg/ml, pH7では15% の試料損失が見られた。 *Aldolase, Lysozyme, Histone, Caseinは0.01mg/ml, pH2.8では 24% の試料損失が見られた。SBP, phosvitin, casein に関してはMicro BCATM Reagent や Coomassie Reagentとの反応性が低く、0.01mg/mlでの正確な測定が困難であった。 核酸：　PBS, TBS, 重炭酸バッファーに溶解した試料 (20-100 μl) を水または TEバッファーに対して2-24時間透析した。 回収率はMolecular Probes Fluorescent Detection Reagents により決定した。核酸量は実験に基づく値であり、試料の上限を示すものではない。 試料 回収率 アッセイ法 M.W. kD A(260) = 1 核酸 (g) Oligo, 25 bases (3K, 7K) 100% OliGreen 8.3 1 260 = ~37 ug 20 ug Oligo, 60 bases (10K) 100% OliGreen 19.8 1 260 = ~37 ug 2 ug and 0.2 ug Salmon Sperm DNA 100% PicoGreen   1 260 = ~50 ug 8 ng Yeast RNA 100% RiboGreen >2,000 1 260 = ~40 ug 4 ng * 核酸の分子量については 平均値 330 daltons/base または 660 daltons/base pair から推定した。 OliGreen, PicoGreen, RiboGreen は Molecular Probes, Incの商標登録となる。

	3.5K SAL MINI 透析ユニットを使用して脱塩を行った。試料容量 5-100 μl の 1 M NaCl をSlide-A-Lyzer MINI Dialysis Unit に添加し、 水1 L に対して 10 分間の透析を行った。最少試験量 (5 μl と 10 μl) のSAL MINI透析ユニットからの回収に関しては、デバイス底部の縁を穏やかにタッピングして、隅に集めピペットにより回収した。NaClスタンダードおよび試料は 50 ml Milli-Q 水 により希釈し、導電率計 (Cole-Parmer)により測定した。 図 3 は各容量に残るNaClの残存％を示す。100 μl 5 M NaClの単位時間あたり透析率は同様に導電率計により測定した（図 4：下に表示されます）。SAL MINI 透析ユニットによるpH交換も同様に速やかに行われる。100 μl の IgG elution buffer, pH 2.8 を1 L の BupH Bicarbonate, pH 9.4 に対して10分間の透析を行い pH 9.5 となった。
	図2. 初濃度1M NaClの各容量を純水に対して10分間の透析を行った。透析後のNaCl残濃度比は 5-10 μl 試料で0％、20-50 μl 試料で < 20%、60-100 μl 試料では <40%となった
	図 3. Slide-A-Lyzer MINI 透析ユニット での 100 μl 5 M NaCl の時間挙動

Ａ． Ｂ． 図 4. SAL MINIによるローダミン標識オリゴヌクレオチドの脱塩前(A)と脱塩後(B)のキャピラリーゲル電気泳動Brown, T.A., ed. (1991). Molecular Biology LabFax, BIOS Scientific Publishers Limited: Oxford, UK, p. 116.

	Slide-A-Lyzer MINI 透析ユニットはバッファー交換やプローブの精製に理想的なツールです。抗体-酵素複合体は、アルデヒド活性化HRPを抗体の一級アミンに結合させるEZ-Link Plus Activated Peroxidase のような製品で調製することができます。このアルデヒド：アミン間の反応（シッフ塩基形成）では高pHでのカップリングにより高い標識率を得ることができます。Tremo Fisher Scientific社 (ピアス)では、10kDaのSAL MINI透析ユニットを使用して、100 μl の 2.4 mg/ml goat anti-mouse IgG を1Lの 重炭酸バッファー(BupH Bicarbonate, pH 9.4)やPBSバッファー(BupH PBS, pH 7.2)に対して1時間の透析を室温で行いました。1時間後、50 μl の 10 mg/ml 活性化HRP (EZ-Link Plus Activated Peroxidase) を透析後の抗体を含むSAL MINI透析ユニットに添加、抗体に対して8M過剰の酵素添加量としました。さらに透析を2時間続けた後、1 μl の 5 M NaBH3CN をシッフ塩基の還元用に添加、30分反応させました。還元後、5 μl の 3 M エタノールアミンを反応停止用に添加し、30分間反応させました。サンプルは1LのPBSに対してオーバーナイトで透析しました。図4 はMolecular Devices 社のプレートリーダーを使用した直接ELISA法による結果を示しています。 高pHのカップリングプロトコルでは、より活性の高いプローブが得られました。
	図5. SAL MINI 透析ユニットで調製したHRP標識Goat anti-Mouse IgGを、マウスIgGをコーティングしたマイクロプレート（BSAでブロッキング）に100 ng/well で添加、37℃で2時間反応させた。プレートは0.05% Tween-20含有PBSで洗浄後、ABTS基質(100 ml)を各ウェルに添加してHRP抗体を直接ELISA法により検出した。pH 9.5で標識したHRP抗体は、pH 7で標識した抗体よりも高い活性を示した。

�@1.3 ml 以下の concentrating solution (#66528/66527) をHandeeTMマイクロチューブ (#69715) に添加します。 �A濃縮するサンプルを透析ユニットに添加、ユニット底部の透析膜がconcentrating solution に接触するように、マイクロチューブに設置、キャップを閉めて下さい。 ＊ サンプル量は concentrating solution の1/3以下にして下さい。 �Bサンプルは 35-45 μl/hour で濃縮されます。

排除分子量 3.5k, 7k, 10k の SAL MINI 透析ユニットについて数種類の化合物の透析速度の評価を行った。開始容量 100 μl の 2 mg/ml ATP (Sigma, M.W. 551), 1 mg/ml Sulfo-NHS-Biotin (M.W. 556), 5 mg/ml bacitracin (Sigma, M.W. 1.4 kD), 0.5 mg/ml vitamin B12 を1Lの純水または TBS, pH 7.2 に対して透析した。透析の進行度を評価するため、間隔をあけて 5-10 μl のサンプルを透析ユニットから回収した。オーバーナイトで透析を行ったサンプルに関しては分取を行わなかった。ATP は A240 (図 5)、Vitamin B12 は A360 (図 6) で測定、Bacitracin は BCA法による測定後A562 で測定 (図 7) した。Biotin に関しては Wallac's Victor Microplate Reader と 2-anilinonaphthalene-6- sulfonic acid (Molecular Probes) による定量を行った。オーバーナイトの透析後、 〜1.3%, 0.8%, 0.2% の biotin がそれぞれ 3.5K, 7K, 10K SAL MINI 透析ユニットで測定された。

図 6. 100 μl の 2 mg/ml ATP 透析速度 図 7. 100 μl の vitamin B12 の透析速度 図 8. 100 μl の bacitracin の透析速度

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