バクテリアタンパク質 抽出試薬(B-PER®) 顆粒体 可溶化試薬 酵母タンパク質 抽出試薬(Y-PER®) 培養細胞タンパク質 抽出試薬(M-PER®) プロテアーゼ/ホスファターゼ インヒビター(Halt®シリーズ) 膜タンパク質 抽出試薬(Mem-PER®) 組織タンパク質 抽出試薬(T-PER®) 昆虫細胞用タンパク質 抽出試薬(I-PER) 植物タンパク質 抽出試薬(P-PER®)   核タンパク質と細胞質タンパク質を分離・抽出 2時間以内に核タンパク質と細胞質タンパク質を分離・抽出 NE-PER試薬により核抽出物と細胞質抽出物を、形質転換系細胞や組織などの試料から得ることができます。NE-PER試薬は、細胞膜を可溶化して細胞核をインタクトに回収、その後核タンパク質を別途抽出することで、核抽出物と細胞質抽出物を分画します。分画した核/細胞質抽出物はウェスタンブロット、ゲルシフトアッセイなど多様なアプリケーションで使用が出来ます。 特徴 培養細胞（HeLa, Cos7, NIH3T3, Hepa 1, C6）、組織（子ウシ肝組織）で使用可能 核抽出物（NER）は透析可能（＊細胞質抽出物（CER）に含まれる界面活性剤成分は不可） プロテアーゼインヒビター添加も可能 ゲルシフト法 (#20148 LightShift® Chemiluminescent EMSA Kit)、ウェスタンブロット、酵素アッセイなどで使用可能 抽出後の免疫沈降（IP）、ウェスタンブロット、BCAによる定量などの実験とのコンパチビリティに関しては、各製品との対応表を御参照下さい。 図1. NE-PER試薬により様々な培養細胞から調製された細胞質抽出物と核抽出物の総タンパク質プロフィール タンパク質の定量はMicro BCA Protein Assay Reagent (#23235) で行った。各数値は別々に抽出した2つの試料の平均から算出した。 標準プロトコルでの細胞使用数: 2 x 106 (HeLa) 細胞ペレット = 20μl（約40mg） 細胞での収率: 核タンパク質 = 40-60 μg/106 (細胞質タンパク質 = 300-400 μg/106) 組織での収率: 核タンパク質 = 1-1.5 mg/100 mg（細胞質タンパク質 = 3-4 mg/100 mg） 試験済みコントロール: 細胞質 (β-Gal, PKC, Hsp90), 核 (Oct-1, p53, DNA polymerase) 図2. Hela細胞からの細胞質フラクションと核フラクションのウェスタンブロット分析　（核/細胞質フラクション間でのタンパク質のクロスコンタミネーション確認） 4試料を総タンパク質量が等しくなるよう (20 μg) に4-20%トリス・グリシン変性勾配ゲルの各レーンにアプライした。タンパク質はニトロセルロース膜に転写し、3％ BSA 入りTBSバッファーにてブロッキングを行った。 A) 転写済みブロットをOct-1抗血清 (1:400) と、続いて2次抗体-HRP標識 (1:100,000) にてプローブした。B) 転写済みブロットをHsp90抗血清 (1:400) と、2次抗体-HRP標識 (1:50,000) でプローブした。両ブロットはSuperSignal® West Pico Chemiluminescent Substrate (#34080) による化学発光基質により検出した。(C: Cytoplasmic, N: Nuclear) ＊ Oct-1(オクタマー結合因子)は核局在、Hsp90は細胞質型タンパクとされています。 Cat.# 製　品　名 容 量 78833 NE-PER® Nuclear and Cytoplasmic Extraction  Reagent Sufficient reagents for extracting 50 cell pellet fractions having packed cell volumes of 20 μl each (a total of ~2.0 g of cell paste) Cytoplasmic Extraction Reagent I(CER I) 10 ml Cytoplasmic Extraction Reagent II(CER II) 550 μl Nuclear Extraction Reagent(NER) 5 ml 250 ml 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com