  
メンバー 膜タンパク質抽出試薬
= 培養細胞、酵母、組織からの膜タンパク質
(< 2-spanner) の抽出に = |
 |
特徴
- 相分離による1時間の膜タンパク質抽出
- 収率は1回貫通型で90％前後、2回貫通型で50％前後（表１）
* サーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランドは5回貫通型の膜タンパク質まで抽出に成功していますが、収率が極端に低下するため推奨していません。
- 親水性タンパク質の膜タンパク質フラクションへの夾雑を最小化
(約10%以下)
- 培養細胞（プロトコル1）、酵母（プロトコル2：ガラスビーズとVortex使用）、軟組織（プロトコル3：ダウンス法）、硬組織（プロトコル4：ポリトロン使用）に対応
- SDS-PAGE、ウェスタンブロット、タンパク定量などの下流アプリケーションに対応（サーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランド
Slide-A-Lyzer 透析ユニットや PAGEprep Kit が使用可能）
|
 |
図2. Mem-PER Kitにより可溶化されたタンパク質の分離
異なる3つの細胞ラインからMem-PER®を使用して、タンパク質を可溶化および抽出した。親水性および疎水性（膜タンパク質）フラクションはウェスタンブロットに供され、細胞内局在性の4種のタンパク質に関してHRP標識2次抗体とSuperSignal® West Femto Chemiluminescent Substrate による化学発光検出を行った。細胞残渣には僅かなタンパク質が検出された（DATA未公開）。
＊ AchE = アセチルコリンエステラーゼ, Cox4 = シトクロームオキシダーゼサブユニット,
Hsp90 = ヒートショックプロテイン 90, M = 可溶化された膜タンパク質フラクション,
H = 親水性タンパク質フラクション
|
表1. Mem-PERによるタンパク質の分離
| Cell Type |
Fraction |
Flotillin
(2回貫通) |
Cox4
(1回貫通) |
AchE
(peripheral) |
Hsp90
(cytosolic) |
| NIH3T3 |
Membrane
Hydrophilic |
45
55 |
90.8
9.2 |
1.7
98.3 |
6.8
93.2 |
| HeLa |
Membrane
Hydrophilic |
48.4
51.6 |
89.1
10.8 |
4.1
95.9 |
15.5
84.4 |
| C6 |
Membrane
Hydrophilic |
56
44 |
94.5
5.5 |
6.4
93.6 |
10.6
89.4 |
 |
図3. Mem-PERを使用して可溶化した酵母タンパク質の分離
3試料を複製し、S. cerevisiae (EGY-194 株)からの酵母タンパク質を可溶化して疎水相分離により分離した。S. cerevisiae の形質膜、オルガネラ膜に関する数種のタンパク質、水溶性の細胞質タンパク質をMem-PER®により可溶化して抽出した。分離効率は各タンパク質に対するウェスタンブロット分析により決定した。全ての細胞残渣において、僅かなタンパク質が検出された（DATA未公開）。
MP = ミトコンドリアポーリン(ミトコンドリア外膜),
PGK = ホスホグリセリン酸キナーゼ, AP = アルカリホスファターゼ, Dpm1p = Dol-O-Man シンターゼ, M = 可溶化された膜タンパク質フラクション, H = 親水性タンパク質フラクション |
 |
図4. ラット肝臓(A)とラット心臓(B)から調製した膜タンパク質抽出物のウェスタンブロット
Mem-PER®により調製された疎水性フラクション(膜タンパク質)と親水性フラクションを
VDAC (31 KDa)、Flotillin-1 (48 KDa)、および
Cellugryn (29 KDa) についてウェスタンブロット分析に供した。 M = 膜タンパク質フラクション、H = 親水性フラクション
|
Product References:
1. Nurnberger, J., et al. (2002). Mol. Biol.
Cell. 13, 3096-3106.
2. Stephano, G.B., et al. (2003). Endocrinology
144(4), 1234-1240.
3. Wojnar, P., et al. (2003). J. Biol. Chem.
278(18), 16209-16215. |
| Cat # |
製 品 名 |
容 量 |
| 89826 |
Mem-PER® Eukaryotic Membrane Protein Extraction
| Mem-PER® Cell Lysis Reagent |
10 ml |
| Mem-PER® Buffer |
25 ml |
| Mem-PER® Membrane Protein Solubilization Reagent |
40 ml |
|
Kit |
関連製品
| Cat # |
製 品 名 |
容 量 |
| 89864 |
2-D Sample Prep Kit for Membrane Proteins |
Kit |
| 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 |
|
info@technochemical.com