



効果的で穏やかな条件による水溶性タンパク質の抽出
I-PER 昆虫細胞用タンパク抽出試薬(#89802)は、浮遊培養や単層培養で培養されたバキュロウィルス感染昆虫細胞からの水溶性タンパク質を穏やかな条件で抽出する試薬です。培養細胞による組換え型(真核細胞)タンパク質の産生では、バキュロウイルス感染昆虫細胞による発現系が効果的で一般的とされます。バキュロウイルス系で発現させたタンパク質は、構造解析や生化学的アッセイなどの様々なアプリケーションに使用されます。
I-PER 試薬は抽出されたタンパク質の機能の維持し、タンパク定量・ウェスタンブロッティング(図1)・Hisタグ精製(図2)などの下流のアプリケーションに直接使用できます。
特徴
- 穏やかな抽出 − 最適化されたマイルドな非イオン性界面活性剤による昆虫細胞からの水溶性タンパクの抽出。
- 効果的 − ソニケーションよりも良好なタンパク抽出
- 対応アプリケーション − ウェスタンブロッティング・Hisタグ精製・タンパク定量・イオン交換クロマトグラフィーに対応
- 培養細胞 − 浮遊培養・単層培養の昆虫細胞からのタンパク抽出が可能
*浮遊培養では5x106〜2x107細胞ペレットあたり1ml I-PER試薬により約0.4〜1.5mg/mlの水溶性タンパクを回収
**単層培養でのI-PER使用量は取扱説明書に記載
(例)100mm dish:500-1,000ul
6-well plate:200-400ul/well
T-25 flask:500ul/flask
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図 1 I-PER によるsf9細胞からの組替え型タンパク質(human
Cyclin B1, mouse STAT6 およびGFP)の抽出
I-PER抽出物を感染Sf9細胞から調製した。ライゼート、不溶性画分、水溶性画分の均一量を、それぞれSDS-PAGEで分離してウェスタンブロット分析に供した。
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図 2 I-PER抽出物からの6×His Cyclin B1のアフィニティ精製
バキュロウィルス感染Sf9細胞を回収し、I-PER試薬により可溶化した。I-PER試薬細胞抽出物は、直接ニッケルキレートアガロース担体カラムに添加し、精製した。試料はSDS-PAGEにより分離後、GelCode Blue Stain Reagent (#24590)により染色した。
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:取扱説明書 :MSDS(英語版) |
| Cat # |
製 品 名 |
容 量 |
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| 89802 |
I-PER Insect Cell Protein Extraction Reagent |
250 ml |
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