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タンパク質抽出 Popperシリーズ

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顆粒体
可溶化試薬
膜タンパク質
抽出試薬(Mem-PER®)
培養細胞タンパク質
抽出試薬(M-PER®)
核/細胞質タンパク
分画試薬(NE-PER®)
プロテアーゼ/ホスファターゼ
インヒビター(Halt®シリーズ)
組織タンパク質
抽出試薬(T-PER®)
酵母タンパク質
抽出試薬(Y-PER®)
昆虫細胞用タンパク質
抽出試薬(I-PER®)
植物タンパク質
抽出試薬(P-PER®)
 

細胞可溶化

培養細胞や組織からのタンパク質の抽出は従来ホモジナイザーやソニケータなどの機械的破砕や凍結融解によって行れてきました。これらの従来法ではタンパク質の熱変性や、時間と手間がかかるという問題もありました。意図的なインクルージョンボディ形成による発現タンパク質の精製やタンパク質定量などを除き、一般的にタンパク質はインタクトな状態で抽出されるほうが望ましく、抽出後の操作も省略できます。また使用する界面活性剤は変性作用が少なく、かつ抽出後の透析による余剰試薬の除去に適した臨界ミセル濃度(CMC)の高い界面活性剤の使用が望ましいとされます。非イオン性界面活性剤は一般的に変性も少なく、イオン交換カラムでの条件選択によりタンパク質を含まないミセルのみを通過させることもできます。

サーモフィッシャーサイエンティフィック ピアスブランドのタンパク質抽出試薬Popperシリーズは、変性作用の少ないマイルドな非イオン性界面活性剤をベースにしたカクテルになっています。酵素などのタンパク質やインヒビターも含みません。バクテリア用、酵母用、培養細胞用、組織用、核タンパク質用、膜タンパク質用、TAG付きタンパク質用などを用意しています。ミトコンドリア分画用試薬も発売されました。これらの製品の多くは1液で構成されており(分画用製品を除く)、簡単で迅速しかもマイルドな条件でタンパク質を抽出できるのが特徴です。

抽出後の免疫沈降(IP)、ウェスタンブロット、BCAによる定量などの実験とのコンパチビリティに関しては、各製品との対応表を御参照下さい。
B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent
ビーパー バクテリアタンパク質抽出試薬シリーズ
#78278, #78243 B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent
#78266 B-PER® Reagent in Phosphate Buffer
#78260 B-PER® II Bacterial Protein Extraction Reagent
#78100 B-PER® 6XHis Fusion Protein Column Purification Kit
#78300 B-PER® 6XHis Fusion Protein Spin Purification Kit
#78200 B-PER® GST Fusion Protein Column Purification Kit
#78400 B-PER® GST Fusion Protein Spin Purification Kit



B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent
穏和かつ効果的にバクテリアE.coli 細胞を溶解します

この試薬はE.coli (または凍結E.coli) から水溶性/不溶性の両方の組み換えタンパク質の回収ができます。また、GST融合タンパク質や6×Hisタグなどのアフィニティ精製にも対応します。B-PER®は透析可能な非イオン性界面活性剤により構成され、マイルドな可溶化でありながら、ソニケータやホモジナイザーなどの機械的な処理を必要としません。20mM Tris HCl (pH7.5)で調製され、酵素等のタンパク質は含まれず、ライセートは直接BCAアッセイによる定量を行うことも出来ます。また、大量発現させたインクルージョンボディ(封入体)の精製にリゾチームを併用することも可能です。
  • 水溶性/不溶性の組み換えタンパク質を回収できます
    (精製後の封入体の可溶化には#78115が必要です)
  • 超音波処理などの機械的破砕なしで使用可能
  • 界面活性剤は透析可能、ライセートは免疫沈降・ウェスタンブロット・タグ精製・BCAアッセイ可能
  • グラム陰性菌、大腸菌(BL21(D3), JM109, DH5alpha, M15株)、昆虫細胞等で使用可能
  • 25mg/ml (250unit) までのDNase I (#89835) が使用可能
    * 通常2-10ul of DNasd/ml of extract
  • Trisバッファー系に対応、0.5MまでのNaClが添加可能
Cat.# 製 品 名 容 量
78243 B-PER® Bacterial Protein Extraction  Reagent 165 ml
78248 B-PER® Bacterial Protein Extraction  Reagent 500 ml



B-PER® II Bacterial Protein Extraction Reagent
少量の組み換えタンパク質の抽出に

B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagentの特徴と長所を引継ぎ、抽出効率を改善しました。少量のサンプル(<10ml)に適しています。
  • 水溶性/不溶性の組み換えタンパク質を回収できます
    (精製後の封入体の可溶化には#78115が必要です)
  • 超音波処理などの機械的破砕なしで使用可能
  • 界面活性剤は透析可能、ライセートは免疫沈降・ウェスタンブロット・タグ精製・BCAアッセイ可能
  • グラム陰性菌、大腸菌(BL21(D3), JM109, DH5alpha, M15株)、昆虫細胞等で使用可能
  • 25mg/ml (250unit) までのDNase I (#89835) が使用可能
    * 通常2-10ul of DNase/ml of extract
  • Trisバッファー系に対応、0.5MまでのNaClが添加可能
抽出効率の比較 B-PER & B-PERII
組み換え型GFPを発現させた約1gのバクテリア細胞ペレットを5mlのB-PER® IIとオリジナルのB-PER® により抽出した。タンパク質の濃度はBCA法により定量死、GFPの活性はルミノメーター(Perkin-ElmerR LS50)により測定した。
A: 各抽出回数での水溶性タンパク質
B: 各抽出回数での組み換え型GFP
1回目の抽出での収率がB-PER® IIでははるかに高い事がわかる
Cat.# 製 品 名 容 量
78260 B-PER® UBacterial Protein Extraction  Reagent 250 ml



B-PER® Reagent in Phosphate Buffer
アミン化合物を含まないPhosphate Buffer ベースのB-PER®試薬


細胞からの抽出後、ライセートは精製や機能解析に供されます。タンパク質やアプリケーションによってはTris系よりPhosphate Buffer系が適している場合があり、この要望に応えるためにPhosphate Bufferベースの製品が開発されました
  • オリジナルのB-PERTM試薬同様、超音波処理なしで組み換えタンパク質の抽出が可能
  • ライセートはアミン反応性クロスリンカーによる架橋化や固定化に直接使用可能
  • 水溶性/不溶性の組み換えタンパク質を回収できます
    (精製後の封入体の可溶化には#78115が必要です)
  • 界面活性剤は透析可能、ライセートは免疫沈降・ウェスタンブロット・タグ精製・BCAアッセイ可能
  • グラム陰性菌、大腸菌(BL21(D3), JM109, DH5alpha, M15株)、昆虫細胞等で使用可
抽出効率の比較 B-PER & B-PER in PBS
約1gのバクテリア細胞ペレットを10ml B-PER®(オリジナルとB-PER® in Phosphate Buffer) で5回抽出した。B-PER®及びB-PER® in Phosphate Bufferは類似した抽出パターンを示し、1回目の抽出で大半のタンパク質が抽出されている。タンパク質濃度は A:BCAによる定量とB:ルミノメーター(Perkin-Elmer® LS50)によるGFP活性の決定により行った。
Cat.# 製 品 名 容 量
78266 B-PER® Reagent in Phosphate Buffer 500 ml

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融合タンパク質精製用<ヒスチジンタグ>
B-PER® 6xHIS Fusion Portein Purification Kit
B-PER抽出による大量発現6×Hisタンパク質精製に最適化された高キャパシティキット

B-PER試薬、Niキレートカラム、洗浄・溶出バッファーを含む精製キットです。大腸菌による発現タンパク質のB-PERによるマイルドな抽出と、高キャパシティカラムによる90%以上の純度(オーバーナイト発現させた10-12mgの6×HisタグGFPを含む250mlの大腸菌培養培地からの精製で評価)での精製が可能です。
  • B-PERによる90%以上の回収率
  • 250ml E.coli培養培地 (OD600=1.5-3.0) 由来のB-PER®ライセート10mlを1回に使用
  • カラムあたり平均10mg以上の組み換えタンパク質が精製可能
  • 2.5〜3時間以内に抽出・精製が完了
Cat.# 製 品 名 容 量
78100 B-PER® 6xHIS Fusion Protein Purification Kit
B-PER® Reagent, 165 ml
6xHis Wash Buffer 1, 45 ml
6xHis Wash Buffer 2, 60 ml
Elution Buffer, 45 ml
Immobilized Nickel Chelated Column, 5 x 1 ml
Kit



B-PER® 6xHIS Spin Portein Purification Kit
スピンカラムを採用した6×Hisタンパク質精製キット

250ml培養培地から回収した細胞ペレットのB-PERによる抽出(10分)、細胞残渣の除去(15分)、1mlゲルとのインキュベーション(10分)、スピンダウンによるゲルペレット回収、付属のバッファーによる洗浄、スピンカラム内での溶出と溶出液のスピンダウン、シンプルで効果的な精製キットです。
  • 約1mgの6xHisタグ融合タンパク質を得ることができます
  • B-PER®抽出(10分)、ゲルとのインキュベーション(10分)、スピンカラムでの4回溶出(30分)
Cat.# 製 品 名 容 量
78300 B-PER® 6xHIS Spin Protein Purification Kit
B-PER™ Reagent, 165 ml
6xHis Wash Buffer , 40 ml
Elution Buffer, 45 ml
Immobilized Nickel Chelated gel, 8ml
Kit




融合タンパク質精製用<GSTタグ>
B-PER® GST Fusion Portein Purification Kit
B-PER抽出による大量発現GST融合タンパク質精製に最適化された高キャパシティキット

B-PER試薬、グルタチオン固定化カラム、洗浄・溶出バッファーを含む精製キットです。大腸菌による発現タンパク質のB-PERによるマイルドな抽出と、高キャパシティカラム(8mg/column)による90%以上の純度での精製が可能です。
  • B-PER®による90%以上の回収率
  • 250ml E.coli培養培地 (OD600=1.5-3.0) 由来のB-PER®ライセート10mlを1回に使用
  • カラムあたり8mg GSTの最大結合キャパシティ (最大キャパシティの80%が推奨量)
  • 2-2.5時間以内に抽出・精製が完了
Cat.# 製 品 名 容 量
78200 B-PER® GST Purification Kit
B-PER® Reagent, 165 ml
Immobilized Glutathione, 5 x 1 ml
Wash Buffer 1, 60 ml
Wash Buffer 2, 85 ml
Glutathione (reduced), 5 x 184 mg
Kit



B-PER® GST Spin Portein Purification Kit
250ml培養培地から回収した細胞ペレットのB-PER®による抽出(10分)、細胞残渣の除去(15分)、1mlゲルとのインキュベーション(10分)、スピンダウンによるゲルペレット回収、付属のバッファーによる洗浄、スピンカラム内での溶出と溶出液のスピンダウン、シンプルで効果的な精製キットです。
  • 約4mgのGST融合タンパク質を得ることができます
  • B-PER®抽出(10分)、ゲルとのインキュベーション(10分)、スピンカラムでの4回溶出(30分)
Cat.# 製 品 名 容 量
78400 B-PER® GST Spin Protein Purification Kit
B-PER® Reagent, 165 ml
Immobilized Glutathione Agarose, 5ml
Wash Buffer , 85ml
Glutathione, 15 x 16 mg
Kit




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