[ピアス]サーモフィッシャーサイエンティフィック IgM Purification Kit

IgM はプロテイン A や G またA/G に対する結合アフィニティが低く、IgM サンプルから他のイムノグロブリンクラスを除去し精製するには複数のステップが必要になります。

MBP(マンナンバインディングプロテイン)はカルシウム依存的に糖鎖（マンノースおよびN-アセチルグルコサミン）特異的に結合するレクチンで、哺乳類の血清に含まれます。
このMBPは補体成分C1のC1qに対して構造的なホモロジーを有します。C1qが24-28KDaのA鎖, B鎖, C鎖のポリペプチド（各6本）により構成されるサブユニット構造を有するのに対して、MBPは31KDaの同一のサブユニットから構成されます。キットでの結合・溶出はカルシウムイオン濃度とEDTA（溶出液）により行われます。

精製キットはマウス腹水からの精製に最適化され、精製IgMの純度は88％以上となります。キットに含まれている5mlカラムの結合キャパシティは腹水では1.5 mg of IgM / カラムが保証スペックとなっています。（精製IgMの場合、ゲル1mlあたり0.75mgになります。）ハイブリドーマ上清からの精製には最適化されていないため、上清を使用する場合は濃縮等の処理やバッチ法でのインキュベーションなどの操作が必要になるかもしれません。

＊リン酸系バッファーは使用できません

特徴

腹水からのIgM精製、純度88％以上
F(ab')2やFabに結合しません
10回以上のカラム再生が可能

The bound material from mouse ascites was eluted from the 5 ml MBP columnas described in the Standard Protocol. The highest 280 nm absorbing fractionfrom the elution was chromatographed using the conditions in the instruction booklet.

References

Nethery, A., Raison, R. and Easterbrook-Smith, S. (1990). Single-step purification of immunoglobulin M on C1q-Sepharose. J. Immunol. Meth. 126, 57-60.
Ohta, M., Okada, M., Yamashina, I. and Kawasaki, T. (1990). The mechanism of carbohydrate-mediated complement activation by the serum mannan-binding protein. J. Biol. Chem. 265, 1980-1984.
Nevens, J.R., Mallia, A.K., Wendt, M.W. and Smith, P.K. (1992). Affinity chroma-tographic purification of immunoglobulin M antibodies utilizing immobilized mannan binding protein. J. Chrom. 597, 247-256.