特徴
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| メロンゲルスピンプレートによるIgGスクリーニング 生理的条件の穏やかな精製バッファー系を使用して、腹水, 細胞培養上清, 血清中の抗体以外のタンパク質をトラップ、抗体は活性を維持したまま通過画分に回収(図1)されます。抗体が回収される精製バッファーは、保存や下流のアプリケーションにも適しています。このメロンゲルによる精製法は一般的な低pH条件での溶出(と中和による再生)で不可逆に変性して抗原結合能が低下するような抗体に特に有効です。プロテインAやGを使用した結合・溶出法に比べても、同等以上の回収率と純度を実現します。メロンゲル・スピンプレートでは15分以内に抗体を単離、各穴で1mgまでのIgGを含む10-100 ulの試料を処理することができます。試料は精製バッファーへの置換か希釈が必要になります。 |
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図 1A. Melon Gel Spin Plate Kit によるマウス腹水からのIgG精製 (mouse myeloma ascites
IgG3, Kappa) 腹水試料を純水にて5 mg/mlに調整、Ascites Conditioning Reagent (#45219)での処理と脱塩後、50 ulをメロンゲルプレートにより精製した。精製IgGと未精製の腹水をReducing Sample Buffer (#39000)で還元、トリスグリシンSDS-PAGEにより分離、Imperial Protein Stain (#24615)によるゲル染色に供した。Lane 1. 分子量マーカー, Lane 2. 腹水(未精製), Lane 3. 腹水からの精製抗体 |
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図 1B. 細胞培養上清からのIgG精製Ab110.1.1 (Northern Illinois University) 細胞培養上清(CCS) Ab110.1.1 をメロンゲルプレート用に調整後、50 ulをウェルに添加、取り扱い説明書に従い精製した。精製IgGと未精製のCCSを還元サンプルバッファーで処理、トリスグリシンSDS-PAGEにより分離、GelCode Blue Safe Protein Stain (#24594)でゲル染色した。Lane 1. MW marker, Lane 2. CCS, Lane 3. CCSからの精製IgG |
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図 1C. ヒト血清からのヒトIgGの精製 ヒト血清20 ulを取り扱い説明書に従い、メロンゲルプレートにより精製した。精製IgGと未精製ヒト血清を還元サンプルバッファーで処理、トリスグリシンSDS-PAGEで分離、GelCode Blue Safe Protein Stain (#24594)によりゲル染色した。Lane 1. 分子量マーカー, Lane 2. ヒト血清, Lane 3. ヒト血清からの精製IgG |
| プロテインAおよびプロテインGスピンカラムによるIgGスクリーニング プロテインAやプロテインGは抗体の精製に従来から使用されています。種特異性はありますが、どちらも抗体のFc部位を介して結合します。一般的にプロテインGはプロテインAに対する親和性が低いモノクローナルIgGやポリクローナルIgGの精製に使用されます。これらはIgGに対して特異的に結合するため、特別な前処理も必要としません。プロテインAスピンプレートとプロテインGスピンプレートで精製された抗体は低pHバッファーで溶出され、活性回復のために中和またはZeba 96-Well Desalting Spin Platesによる脱塩が行われます。各ウェルには50 ulの固定化プロテインAまたはGレジンが含まれ、0.5 mgまでのIgGを含む10-100 ulの試料を各ウェルで処理できます。この「結合・洗浄・溶出」法は腹水(データ未掲載), 培養上清(データ未掲載), 血清(図2)からのIgG精製に効果的です。また、スピンプレートによる免疫沈降にも利用が可能です。 |
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図 2. Purification of human IgG from human serum using Thermo Scientific
Protein A and Protein G Spin Plate Kits. 40 ulヒト血清を取扱い説明書に従いプロテインAまたはプロテインGスピンプレートで精製した。回収した試料と標準品は還元後、トリスグリシンSDS-PAGEにより分離、Imperial Protein Stainによるゲル染色に供した。Lane 1. 分子量マーカー, Lane 2. ヒトIgG標準品, Lane 3. ヒト血清, Lane 4. 通過画分, Lane 5. 溶出物 |
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関連製品 Zeba 96-well Desalt Spin Plates(日本語) Melon Gel IgG Spin Purification Kit(日本語) NAb Protein A Plus Spin Kit(メーカーサイト：英文) NAb Protein G Spin Kit(メーカーサイト：英文) |
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 ：取扱説明書  ：MSDS(英語版) |
| Cat # | 製 品 名 | Pkg. Size | ||||||||||||||||
| 45208 | Melon Gel Spin Plate Kit for IgG Screening (2 plate kit)
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Kit | |
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| 45202 | Protein A Spin Plate for IgG Screening(1 plate Kit)
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Kit | |
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| 45204 | Protein G Spin Plate for IgG Screening(1 plate Kit)
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Kit | |
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| 89813 | Collection Plates (Polypropylene) 96 well, V-Tip for use with filter spin plates |
6 plate | 無し | |||||||||||||||
| 45205 | Balance Plate | 1 plate | 無し | |||||||||||||||
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