抗体由来のバンド阻害なし　高回収率の抗体スピンカラム サーモフィッシャーサイエンティフィック　ピアスブランドは架橋化技術とアフィニティクロマトグラフィー技術を組み合せた、新しい免疫沈降法Seieze X(シーズ　エックス)を実現しました。まず、1次抗体はプロテインAまたはGに結合され、クロスリンカーDSSによって担体に共有結合的に固定化されます (Figure 1)。これにより抗体は細胞ライセートのタンパク質を"Seize(捕らえる)"ように適切に配向されます。ライセート中の未結合のタンパク質は遠心分離により効果的に排除され、抗原のみがマイルドな溶出バッファーにより回収されます。SDS-PAGE上では免疫沈降したタンパク質のみのシングルバンドが検出され、抗体由来の重鎖や軽鎖のバンドは見られません(Figure 2)。固定化抗体レジンによる高い抗原回収率と抗体カラムの再利用が可能です。 　古典的な免疫沈降法では、最初に抗体を細胞ライセートとインキュベーションして、抗体・抗原コンプレックスを形成させます。続いてプロテインAやGが固定化されたビーズにより沈降・遠心分離され、SDSサンプルバッファーや還元剤と共にボイルされます。この方法では抗体も変性するため、SDS-PAGE上で重鎖や軽鎖のバンドが抗原のバンドを阻害することになります。また、抗体やプロテインAやGも破壊されるため再利用も出来ません。 　貴重な1次抗体を保護してSDS-PAGEでの抗体由来のタンパク質コンタミも防ぐ、Seize Xキットを是非お試し下さい。Seize X キットには4種類の抗体カラムを調製、各カラムでの10回程度（計4×10=40回のIP）のIPを行うのに充分な試薬類が含まれます。 特徴 抗体由来の重鎖/軽鎖のバンドがSDS-PAGEのゲル染色でも検出されない スピンカラムによる高い回収率、ピペッティングによる上清の除去が不要 貴重な1次抗体を繰り返し再利用出来るため経済的 タンパク質抽出試薬（バクテリア、酵母、哺乳細胞）を含むキットも選択可能 Figure 2.　免疫沈降法のSDS-PAGEによる分析 GFP (green fluorescent protein) 融合タンパク質を大腸菌で発現させ、B-PER Bacterial Protein Extraction Reagent により抽出、ヤギ抗GFP抗体により免疫沈降した。抗体は一方を古典的な免疫沈降法（バッチ法）により直接ライセートとインキュベーション、一方はSeize X Bacterial Immunoprecipitation Kit のプロテインG担体に固定化された。免疫沈降されたタンパク質は還元され、SDS-PAGEに供され、GelCode Blue Stain Reagent (Cat# 24590)によりCBB染色された。Lane 1 はSeize X法により免疫沈降されたGFP融合タンパク質のシングルバンド、Lane 2 は古典法により免疫沈降されたGFP融合タンパク質で抗体由来の重鎖（50KDa付近）と軽鎖（25KDa付近）のバンドが現れているのがわかる。Lane 3 はBlueRanger Prestained Protein Molecular Weight Markersによる分子量マーカーを示す。 Binding Capacity(結合量　一覧表) 参考文DM献 Cat # 製　　品　　名 Pkg. 45210 Seize X Protein G Immunoprecipitation Kit Sufficient reagents for immobilizing four antibodies and performing 40 immunoprecipitations. ImmunoPure Immobilized Protein G Plus 1 ml Binding/Wash Buffer 1 500 ml Quenching/Wash Buffer 2 500 ml Elution Buffer 50 ml Sample Loading Buffer 5 ml DSS Crosslinker 8 x 2 mg Handee Spin X cups and collection tubes Kit 45215 Seize X Protein A Immunoprecipitation Kit Sufficient reagents for immobilizing four antibodies and performing 40 immunoprecipitations. Kit ImmunoPure Immobilized Protein A Plus 1 ml Binding/Wash Buffer 1 500 ml Quenching/Wash Buffer 2 500 ml Elution Buffer 50 ml Sample Loading Buffer 5 ml DSS Crosslinker 8 x 2 mg Handee Spin X cups and collection tubes Kit 45220 Seize X Bacterial Immunoprecipitation Kit →代替　#45210 Kit 45225 Seize X Mammalian Immunoprecipitation Kit Sufficient reagents for immobilizing four antibodies and performing 40 immunoprecipitations. Same Contents as Product #45210 plus M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent 45230 Seize X Yeast Immunoprecipitation Kit →代替　#45210 と #78991 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com