酵素 （分子量） タイプ 基質特異性 最適pH 賦活（エンハンサー） 阻害 pI ペプシン(35,000) 酸性 広い Phe,Met, Leu,Trp 1 (1-5)   PH >　6エポキシド 11 パパイン(23,000) システイン 広い Arg,Lys, His,Gly,Tyr 6.5 (4-9.5) Cys、硫化物、シアン化物（EDTA、NBS、アクリジン色素） 重金属、カルボニル化合物、NEM、p-chloromercuro-benzoate 1.5 フィシン(26,000) システイン 無電荷/脂肪族アミノ酸 6.5 (4-9.5) Cys、硫化物、シアン化物（EDTA、NBS、アクリジン色素） 重金属、カルボニル化合物、NEM、p-chloromercuro-benzoate 1.5 トリプシン(24,000) セリン Arg,Lys 8 安定化剤としてCa2+ 有機リン化合物、DFP、ベンズイミジン 1.5 IgGからFabフラグメントを調製する最も簡単な方法です ヒトまたはマウスIgGを固定化パパイン酵素によりFabフラグメントとFcフラグメントに消化する完全キットです。消化後はキットに含まれる固定化プロテインAカラムによりフラグメントの精製を行います。パパインによる切断は重鎖間のジスルフィド結合のN末端側が1次消化部位、 2次消化に関してはヒト、ラビット、マウスIgG1では比較的安定とされています。マウスIgG1のサブクラスではIgG1 >IgG2a >IgG3 >IgG2bの順に2次消化への耐性が低下するようです。 抗体フラグメントが利用されるアプリケーション： 組織免疫染色（IH） 体外診断（IVD）を含む免疫アッセイ法 腫瘍検出と放射性セラピーのための放射性免疫局在診断 免疫毒素複合体による免疫ターゲティング 抗体結合サイトの結晶学的研究 Fc結合タンパク質とエフェクターの機能の研究 Fab フラグメントの特徴: マクロファージ・B細胞・T細胞･好中球・肥満細胞のFc受容体から影響を受けない 抗原を沈殿させない F(ab')2 フラグメント作製と精製に比べて容易 IgG に比べて放射性標識フラグメントは正常組織からの除去が迅速 抗原性の低下による、ヒトでの抗マウス免疫グロブリン(HAMA)応答の低減 貪食の影響を受け難い Fc Fragmentsの特徴: 抗原結合部位からの干渉を受けないIgGのエフェクター機能の研究 組織染色でのFc受容体ブロッキング剤としての使用 Fab参考文献 Fabプロトコル 　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版) Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 20341 Immobilized Papain 16 - 40 BAEE units / mg of papain（固定化前）(BAEE: ベンゾイル-L-アルギニンエチルエステル塩酸塩)* 固定後の活性（BAEE units / gel）は各Lot分析表を参照 5 ml 44885 ImmunoPure® Fab Preparation Kit * 10 mg IgG からのFab調製20回分に充分な試薬類が含まれる Immobilized Papain 5 ml Cysteine HCl 1 gm Phosphate Buffer, pH 10.0 270 ml AffinityPak Protein A Columns 2 x 2.5 ml ImmunoPure IgG Binding Buffer 1,000 ml ImmunoPure IgG Elution Buffer 500 ml Accessory Pack(Resine Separatero:10 column extender:2 Kit IgGからF(ab')2フラグメントを調製する最も簡単な方法です 固定化ペプシン酵素により抗原結合活性を残したF(ab')2フラグメントに消化するため、酵素のコンタミネーションもありません。F(ab')2の精製は固定定化プロテインAカラムを通過させることで行います。ペプシンによる切断は重鎖間のジスルフィド結合のC末端側が1次消化部位、 2次消化に関してはヒト、ラビット、マウスIgG1では比較的安定とされています。マウスIgG1のサブクラスではIgG1 >IgG2a >IgG3 >IgG2bの順に2次消化への耐性が低下するようです。 F(ab')2 フラグメントの特徴: マクロファージ・B細胞・T細胞・好中球・肥満細胞などのFc受容体の影響を受けない ２量体であるためアフィニティの低い抗体でも抗原結合キャパシティを維持しやすい 抗原を沈殿 F(ab')2 調整：参考文献 F(ab')2調整：プロトコル 　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版) Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 20343 Immobilized Pepsin 活性: >6000 units/ml of gel 5 ml 44888 ImmunoPure® F(ab')2 Preparation Kit Immobilized Pepsin 5 ml Affinity-Pak immobilized Protein A columns 2 x 2.5 ml ImmunoPure IgG Binding Buffer 1,000 ml ImmunoPure IgG Elution Buffer 500 ml Kit MouseモノクローナルIgG1からの Fab and F(ab')2 フラグメント調製 マウスIgG1からのF(ab')2調製は酸性プロテアーゼのペプシンによる消化でも可能ですが、インタクトな状態のマウスIgG1に比べ、消化産物は活性やアフィニティに問題がありました。この問題は固定化フィシンによる中性pH域での消化で解決することが出来ます。フィシンはシステインプロテアーゼでマウスモノクローナルIgG1をシステイン濃度依存的（1mMシステイン共存下ではF(ab')2 、10mMシステイン共存下ではFab）に断片化します。 F特徴: マウスIgG1からFabとF(ab')2を調製 反応も簡単に制御 抗体フラグメントへのフィシンの混入を防止 Reference  Sykaluk, L. (1992). Pierce Chemical Company, unpublished results. Mariani, M., et al. (1991). A new enzymatic method to obtain high-yield F(ab')2 suitable for clinical use from mouse IgG1. Mol. Immunol. 28, 69-77. Kurkela, R., et al. (1988). Preparation of F(ab')2 fragments from mouse monoclonal IgG1 suitable for use in radioimaging. J. Immunol. 110, 229-236. Wilson, K.M., et al. (1991) Rapid whole blood assay for HIV-1 seropositivity using an Fab-peptide conjugate. J. Immunol. Meth. 138, 111-119. 　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版) Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 44880 ImmunoPure® IgG1 Fab and F(ab')2 Preparation Kit ufficient reagents for digesting up to 250 mg of Mouse IgG1 Immobilized Ficin 5 x 2 ml Cysteine HCl 1 g ImmunoPure IGg1 Digestion Buffer (10X) 50 ml AffinityPak Immobilized Protein A Columns 2 x 2.5 ml ImmunoPure Binding Buffer 1,000 ml ImmunoPure IgG1 Mild Elution Buffer 2 x 500 ml Immobilized Ficin Strorage Buffer 100 ml Column Extenders 2 ea. Kit 44881 Imobilized Ficin 5 ml IgM抗体のフラグメント化キット In vitroでIgMが使用されるアプリケーションでは、IgM抗体のサイズが問題となります。組織染色ではインタクトなIgMを組織に効果的に浸透することは難しく、in vitroやin vivoでの研究には、より小さなサイズで活性を有するIgMフラグメントが必要になります。本製品は様々なサイズのIgMフラグメントを調製するために、固定化酵素（トリプシンとペプシン）を組合わせたキットになります。 図: ImmunoPure IgM Fragmentation Kitの図解 特徴: 固定化トリプシン： F(ab')2、Fab、IgG型、Fc(5μ) フラグメント 固定化ペプシン：F(ab')2、Fab、Fvフラグメント IgMの消化と精製に必要な試薬類と詳細な取扱説明書が添付 IgM 調整：参考文献 　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版) Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 44887 ImmunoPure IgM Fragmentation Kit 1 mg/mlマウスIgMまたはヒトIgM １mlからのフラグメント化に必要な試薬類を含む: Iodoacetamide 16 mg Immobilized Pepsin 2 × 2 ml columns Immobilized Trypsin 2 × 2 ml columns 2-mercaptoethylamine 6 mg Iodoacetamide 16 mg IgM Digestion Buffer 400 ml IgM F(ab´)2 Digestion Buffer 200 ml C100 Concentrator 7 each C30 Concentrator 5 each D-Salt Dextran Desalting Column, 5K MWCO 2 × 5 ml 5 ml 製品情報は掲載時点のものですので、ご覧いただくタイミングにより製品情報が変更されている場合があります。 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com