特徴
- 100サイクル以上のアフィニティ精製後でも、99%(初期比)のキャパシティを維持
- 100psi(6.9 bar)までの低〜中圧クロマトグラフィー、最大流速3000 cm/hr
- カップリングによる離脱基や副産物などの遊離が無く安全
- 18ヶ月間安定(4℃、要乾燥保管)
UltraLinkサポートのスペック
| 使用pH域 |
pH 1-13 |
| 使用温度 |
4-40 ℃ |
| 使用回数 |
100サイクル以上(リカバリー99%以上) |
| 平均ビーズ径 |
50-80 ミクロン |
| 官能基 |
250 μmols/gram of gel (= 31.25 μmols/ml of gel ) |
| 排除分子量 |
2000 KDa以上 |
| 表面積 |
250平方メートル/グラム |
| ポア容積 |
1.2 cc/gram (ゲルベッド容積の60%) |
| ポアサイズ |
1000オングストローム |
| 膨潤時容積 |
8-10 ml/gram of beads |
| 最大耐圧 |
100 psi(6.9 bar) |
| 最大linear velocity |
3000 cm/hr |
| エンドトキシンレベル |
0.62 EU/ml of gel |
| リガンド結合キャパシティ |
Protein A : 240 mg/gram of beads (= 30 mg/ml of gel ) |
| IgG : 88 mg/gram of beads (= 11 mg/ml of gel ) |
| BSA : 120 mg/gram of beads (= 15 mg/ml of gel ) |

UltraLink® Biosupport Mediumの圧力−線流速曲線
カップリング反応の概略(計6時間)
- リガンドをドライビーズに直接添加
- ボルテックス&1時間の攪拌インキュベート(マグネチックスターラー不可)
- 1200×g, 5-10 minの遠心または25ミクロンの濾過
- 上清の除去(上清中の未結合リガンドのアッセイはBCA法をお薦めします。ビーズ製造時にTriton X-100 が使用されているためA280による測定は阻害される可能性があります。)
- クエンチングバッファーを添加(未反応サイトのブロック)
- ボルテックス&2.5時間の攪拌インキュベート
- (PBS等)洗浄バッファーと高塩濃度(1M NaCl等)バッファーによる洗浄
- 適当なファイナルバッファーで再懸濁して調製

推奨カップリングバッファー
| バッファー |
バッファー |
| MOPS |
CAPS |
| TAPS |
HEPES |
| TES |
TAPSO |
| CHES |
AMPSO |
| POPSO |
MES |
| 炭酸ナトリウム |
ピロリン酸ナトリウム |
| 酢酸ナトリウム |
重炭酸ナトリウム |
| クエン酸ナトリウム |
ホウ酸ナトリウム |
| ビシン |
トリシン |
| PBS |
CAPS |
|
*トリス等の1級アミンを含むバッファーはカップリング反応を阻害するため使用不可
*アジ化ナトリウム、フェノール、チオシアン化カリウム、メルカプトエタノール、硫化アンモニウムを含むバッファーは使用不可 |
アフィニティ精製のサイクル数とキャパシティ
| サイクル数 |
IgG溶出量 (mg/ml) |
ピークエリア面積
(x10-6) |
% (初期溶出量比) |
| 1 |
5.47 |
1.43 |
100 |
| 20 |
5.66 |
1.45 |
116 |
| 50 |
5.26 |
1.42 |
96 |
| 100 |
5.28 |
1.43 |
97 |
| 139 |
5.41 |
1.37 |
99 |
| 組換え型プロテインAをカップリングしたUltraLinkゲルを、1.0×1.3cmカラムで使用した。ATCC HB-124 DB9G8 (murine
anti-insulin IgG2ak) はホーローファイバーリアクター (Endotronics社 Acusyst-P5)中で10% ウシ胎児血清入りRPM11640培地
(Gibco社)を用いて培養された後、0.45ミクロンMillipore社 Pelicon6カセットにて濾過された組織培養液 25 mlをカラムにロードした。カラムはPBS,
pH7.2で洗浄し、溶出は0.1M クエン酸ナトリウムバッファー, pH2.5を使用した。5サイクル毎に行うカラムクリーニングは3Mグアニジン塩酸/20mM
PBS, pH7.2で行い、平衡化はPBS, pH7.2で行った。サンプルロードは 1 ml/min (毎時60カラム容量)、そのほかは 3
ml/min (毎時180カラム容量)で行った。 |
|