Thermo Sientific PIERCE brandThermo Scientific:サーモサイエンティフィック
bis-アクリルアミド/アズラクトン共重合ポリマー
UltraLink Biospport Medium


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ピアス社 UltraLink サポートはアフィニティクロマトグラフィー用にデザインされた共重合ポリマーです。ドライビーズにカップリングバッファーで溶解した精製リガンドを直接に添加してビーズを膨潤させることで、マトリックス骨格中のアズラクトン基は開環し4原子スペーサーを介してリガンド分子のアミノ基、チオール基、フェノール基、水酸基と結合します。また固定されるリガンドにより、バッファーの塩濃度、pH、温度などの反応条件を柔軟に選択することが可能で、中低圧クロマトグラフィーでの使用や100サイクル以上のアフィニティ精製を繰り返してもリガンド固定時の初期キャパシティを維持できるのが特徴です。

特徴
  • 100サイクル以上のアフィニティ精製後でも、99%(初期比)のキャパシティを維持
  • 100psi(6.9 bar)までの低〜中圧クロマトグラフィー、最大流速3000 cm/hr
  • カップリングによる離脱基や副産物などの遊離が無く安全
  • 18ヶ月間安定(4℃、要乾燥保管)
  UltraLinkサポートのスペック
使用pH域 pH 1-13
使用温度 4-40 ℃
使用回数 100サイクル以上(リカバリー99%以上)
平均ビーズ径 50-80 ミクロン
官能基 250 μmols/gram of gel (= 31.25 μmols/ml of gel )
排除分子量 2000 KDa以上
表面積 250平方メートル/グラム
ポア容積 1.2 cc/gram (ゲルベッド容積の60%)
ポアサイズ 1000オングストローム
膨潤時容積 8-10 ml/gram of beads
最大耐圧 100 psi(6.9 bar)
最大linear velocity 3000 cm/hr
エンドトキシンレベル 0.62 EU/ml of gel
リガンド結合キャパシティ Protein A : 240 mg/gram of beads (= 30 mg/ml of gel )
IgG : 88 mg/gram of beads (= 11 mg/ml of gel )
BSA : 120 mg/gram of beads (= 15 mg/ml of gel )

UltraLink Biosupport Mediumの圧力−線流速曲線
UltraLink® Biosupport Mediumの圧力−線流速曲線


カップリング反応の概略(計6時間)
  1. リガンドをドライビーズに直接添加
  2. ボルテックス&1時間の攪拌インキュベート(マグネチックスターラー不可)
  3. 1200×g, 5-10 minの遠心または25ミクロンの濾過
  4. 上清の除去(上清中の未結合リガンドのアッセイはBCA法をお薦めします。ビーズ製造時にTriton X-100 が使用されているためA280による測定は阻害される可能性があります。)
  5. クエンチングバッファーを添加(未反応サイトのブロック)
  6. ボルテックス&2.5時間の攪拌インキュベート
  7. (PBS等)洗浄バッファーと高塩濃度(1M NaCl等)バッファーによる洗浄
  8. 適当なファイナルバッファーで再懸濁して調製


推奨カップリングバッファー
バッファー バッファー
MOPS CAPS
TAPS HEPES
TES TAPSO
CHES AMPSO
POPSO MES
炭酸ナトリウム ピロリン酸ナトリウム
酢酸ナトリウム 重炭酸ナトリウム
クエン酸ナトリウム ホウ酸ナトリウム
ビシン トリシン
PBS CAPS
*トリス等の1級アミンを含むバッファーはカップリング反応を阻害するため使用不可

*アジ化ナトリウム、フェノール、チオシアン化カリウム、メルカプトエタノール、硫化アンモニウムを含むバッファーは使用不可

アフィニティ精製のサイクル数とキャパシティ
サイクル数 IgG溶出量 (mg/ml) ピークエリア面積
(x10-6)
% (初期溶出量比)
1 5.47 1.43 100
20 5.66 1.45 116
50 5.26 1.42 96
100 5.28 1.43 97
139 5.41 1.37 99
組換え型プロテインAをカップリングしたUltraLinkゲルを、1.0×1.3cmカラムで使用した。ATCC HB-124 DB9G8 (murine anti-insulin IgG2ak) はホーローファイバーリアクター (Endotronics社 Acusyst-P5)中で10% ウシ胎児血清入りRPM11640培地 (Gibco社)を用いて培養された後、0.45ミクロンMillipore社 Pelicon6カセットにて濾過された組織培養液 25 mlをカラムにロードした。カラムはPBS, pH7.2で洗浄し、溶出は0.1M クエン酸ナトリウムバッファー, pH2.5を使用した。5サイクル毎に行うカラムクリーニングは3Mグアニジン塩酸/20mM PBS, pH7.2で行い、平衡化はPBS, pH7.2で行った。サンプルロードは 1 ml/min (毎時60カラム容量)、そのほかは 3 ml/min (毎時180カラム容量)で行った。


UltraLink®Biosupport Medium

Cat # 製  品  名 Pkg. Size
53110 UltraLink Biosupport Medium (8-10 ml) 1.25 g
53111 UltraLink Biosupport Medium (50 ml) 6.25 g

UltraLink®固定化プロテイン

Cat # 製  品  名 Pkg. Size
53142 Protein A Plus UltraLink® Resin 5 ml
53128 Protein G Plus UltraLink® Resin 2 ml
53133 Protein A/G Plus UltraLink® Resin 10 ml

その他官能基カップリング用UltraLink®製品

Cat # 製  品  名 Pkg. Size
53155 UltraLink Ioadacetyl gel
ヨードアセチル基によるチオールとの結合
10 ml
53149 UltraLink Hydrazide
ヒドラジド基による糖鎖との結合
10 ml
53154 UltraLink EDC/DADPA Immobilization Kit
カルボキシル基との結合
Kit


Cat # 製  品  名 Pkg. Size
53150 UltraLink Immobilized Neutravidin 5 ml
53151 UltraLink Immobilized Neutravidin Plus 5 ml
53113 Pierce® Streptavidin UltraLink Resine 2 ml
53114 Pierce® Streptavidin UltraLink Resine 5 ml
53116 Pierce® Streptavidin Plus UltraLink Resine 2 ml
53117 Pierce® Streptavidin Plus UltraLink Resine 5 ml





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