転写直後のブロットを10分間処理するだけで、現在の1次抗体使用量を1/3まで（最高で1/100まで）削減することが出来ます。 特徴 ボトルから直接使用可能な1液による構成（希釈も不要） わずか10分間の操作、1次抗体量を大幅（最高で1/100まで確認）に削減 最低でも通常の1/3の1次抗体量で、同等もしくはそれ以上のシグナル強度 発色法/発光法などの検出法やHRP/APなどの標識酵素に拘らず使用可能 Antibody Extender Solution(AES) NC プロトコル概略 Antibody Extender Solution NC Promise Proper use of Antibody Extender Solution NC will retain post-transfer detection of your target protein on nitrocellulose membrane by using at least three times less primary antibody than you are currently using. If you don't experience these cost-savings and equivalent performance on nitrocellulose membrane, we will refund the cost of the product. メーカーより上記の内容のコメントがでております。詳細な手続き内容については下記弊社までお問い合わせ下さい。 表１　目的タンパク質とＡＥＳ(Antibody Extender Solution）処理の効果 目的タンパク質 一次抗体 一次抗体の削減率 Caspase-3 Anti-Caspase-3 3X* Glutathione S-Transferase-BIR2 Anti-GST** 4X NFkB Anti-NFkB 4X 6xHis-Green Fluorescent Protein Anti-6xHis** 4X Ubiquitin Anti-Ubiquitin 10X p53 Anti-p53 12X IkBa Anti- IkBa 20X IL-6 Anti-IL-6 25X CyclinE Anti-CyclinE 100X Phosphotyrosine Anti-PY-20 100X * 1次抗体の削減率を表す。 AES未処理のブロット上で目的タンパク質を化学発光法や発色法により検出した場合に得られるシグナル強度と同等のシグナルをAES処理されたブロットで得るために使用される1次抗体の削減量 ** ポリクローナル抗体を示す。これ以外はモノクローナル抗体を使用。 図1. 化学発光法による検出とAES処理の効果 図1A. Control 1 図 1B. Control2 (1次抗体の削減量：×12) 図1C. AES処理 (1次抗体の削減率：×12) 図 1. A-431細胞核抽出物ブロットのHRPと化学発光法によるｐ53の検出比較 4-20％トリス・グリシンゲルで電気泳動し、ニトロセルロース膜へ転写した各ブロットを作製した。AES未処理の control blot (図 1A) とAES未処理で1次抗体（anti-p53）の使用量も12分の1に削減したcontrol blot (1B) を示す。これら2つのブロットと同様に作製された別のブロットをAESで処理した (Figure 1C)。 1A（AES未処理、1次抗体は通常量）と1C（AES処理、1次抗体は1/12量）において同等の感度が得られ、1B（AES未処理、1次抗体は1/12量）では明らかに弱いシグナルが得られた。2次抗体にはGoat anti-Mouse HRP (Product #31432)を使用した。A-431 核抽出物の各レーンへのアプライ量: レーン1. 1 μg, レーン 2. 2 μg, レーン 3. 3 μg, レーン 4. 4 μg, レーン 5. 化学発光検出用分子量マーカー 図2. 発色法による検出とAES処理の効果 図2A. Control 1 図 2B. Control 2 (1次抗体の削減量：×12) 図2C. AES処理 (1次抗体の削減率：×12) 図 2. A-431細胞核抽出物ブロットのAPと発色法検出によるｐ53の検出比較 4-20％トリス・グリシンゲルで電気泳動し、ニトロセルロース膜へ転写した各ブロットを作製した。AES未処理の control blot (図 2A) とAES未処理で1次抗体（anti-p53）の使用量も12分の1に削減したcontrol blot (2B) を示す。これら2つのブロットと同様に作製された別のブロットをAESで処理した (Figure 2C)。 1A（AES未処理、1次抗体は通常量）と1C（AES処理、1次抗体は1/12量）において同等の感度が得られ、1B（AES未処理、1次抗体は1/12量）では明らかに弱いシグナルが得られた。2次抗体にはGoat anti-Mouse AP (Product #31322)を使用した。発色基質として1-Step NBT/BCIP.を使用した。A-431 核抽出物の各レーンへのアプライ量: レーン1. 2.5 μg, レーン 2. 5 μg, レーン 3. 7.5 μg, レーン 4. 10 μg, レーン 5. BlueRanger Pre-stained Protein Molecular Weight Markers (Cat # 26681) 目的タンパク質 /発現タグ 一次抗体 削減率 ライゼート 添加量 Blots (ＡＥＳ処理) Control Blot (ＡＥＳ未処理)  　　1　　　　2　　　　　3　　　　　4  　　1　　　　2　　　　　3　　　　　4 Caspase-3 3X Lane 1: 2.5 ug Lane 2: 5 ug Lane 3: 7.5 ug Lane 4: 10 ug Glutathione S-Transferase-BIR2 4X Lane 1: 2.5 ng Lane 2: 5 ng Lane 3: 7.5 ng Lane 4: 10 ng NF-κ-B 4X Lane 1: 2 ug Lane 2: 4 ug Lane 3: 6 ug Lane 4: 8 ug 6xHis-Green Fluorescent Protein 4X Lane 1: 4 ug Lane 2: 8 ug Lane 3: 12 ug Lane 4: 16 ug Ubiquitin 10X Lane 1: 1.4 ug Lane 2: 2.8 ug Lane 3: 4.2 ug Lane 4: 5.6 ug p53 12X Lane 1: 1 ug Lane 2: 2 ug Lane 3: 3 ug Lane 4: 4 ug IkBa 20X Lane 1: 1.4 ug Lane 2: 2.8 ug Lane 3: 4.2 ug Lane 4: 5.6 ug IL-6 25X Lane 1: 100 pg Lane 2: 200 pg Lane 3: 300 pg Lane 4: 400 pg CyclinE 100X Lane 1: 2.5 ug Lane 2: 5 ug Lane 3: 10 ug Lane 4: 15 ug Phosphotyrosine 100X Lane 1: 5 ug Lane 2: 7.5 ug Lane 3: 10 ug Lane 4: 15 ug Note: The control blots and the Antibody Extender Solution NC-treated blots were subjected to identical experimental conditions. No Antibody Extender Solution NC treatment was applied to the controls before immunodetection on nitrocellulose. 　：取扱説明書　　　：MSDS(英語版) Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 32110 MiserTM Antibody Extender Solution NC 500 ml 32105 MiserTM Antibody Extender Solution NC トライアルパック 50 ml 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com