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サーチライトテクノロジー
SearchLight Technology

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SearchLight® Multiplex Assays は最大16までの異なる捕獲抗体が同一ウェル内にスポットされた96-wellプレート形式の多重ELISAです。 (384-wellプレート形式では4抗体スポットまでになります。)　試料やスタンダードをウェルに添加、目的タンパク質はそれぞれの特異抗体により捕獲され、洗浄操作の後にビオチン標識された抗体カクテルが添加されます。これらの抗体はスポット抗体により捕獲されている目的タンパク質に結合し、２回目の洗浄操作の後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン (SA-HRP) が添加されます。ビオチンに結合したSA-HRPは 化学発光基質 SuperSignal® ELISA Femto Chemiluminescent Substrate により検出されます。プレート全体をCCDイメージャーにより画像化、専用解析ソフトウェアによる各スポットからのシグナル測定、既知濃度のスタンダードによる検量線の作成と未知濃度の試料の分析が行われ、検量線から分析対象（試料）の濃度が算出（pg/ml）されます。

特徴

  • SearchLight® Multiplex Assay を使用すれば16回分のELISAからの結果を2時間半の1回のアッセイで得ることが出来ます。
  • 5〜50 μl/well の少量サンプルで最大16の異なる対象（タンパク質）の分析が可能です
  • 一度に最大16までの対象について測定が行えるので、サンプルの保存や凍結融解の必要もなくより正確な測定が可能です
  • ピアス社の化学発光基質 SuperSignal® ELISA Femto Chemiluminescent Substrateを検出に使用、従来の発色法に比べると 2〜10倍の高感度です
  • SearchLight® Array はプレート洗浄機と分注機に対応したELISAプレートを利用しているため自動化が可能です
  • SearchLight® Assay は画像解析（12, 14, 16 bitのTIFFファイルが保存可能なCCDカメラおよび解析ソフトウェア）までは従来のサンドイッチELISA法に基づいた操作です

パフォーマンス
全ての SearchLight® Assay は最適な感度・特異性・精度・線型性を保証するため希釈率やダイナミックレンジが検証されています。天然型タンパクに対する抗体認識は天然型サンプルでの目的タンパクによる検出により確認が行われています。さらに、血清や血漿やその他のマトリクスでの添加回収試験を行いアッセイ評価も行っています。各アッセイは個々の組替え型タンパクに対する特異性についてアレイ上で広範囲に試験されています。特異的捕獲抗体スポットのみが、その目的タンパクを検出します。 (図 2)
図 2. SearchLight® Assay の特異性
SearchLight® 16-Plex Array (ラットサイトカインおよびケモカイン検出用の16スポット) を特異性試験に用いた。各組替型ラットサイトカインおよびケモカインは 1,000 pg/ml に複製、アレイされている各捕獲抗体がその目的タンパクに対してのみ特異的であることを示す目的で個別に試験した。例えば、IL-1betaとラベルしたウェルには1,000 pg/ml のIL-1beta を試料として添加した。化学発光シグナルはIL-1beta捕獲抗体の位置でのみ検出されている。16-plex arrayにおける、他の分析対象に関する特異性についても示した。 		図 2. SearchLight® Assay の特異性

図 3A図 3B 図 3A および 3B. SearchLight Assays の測定内誤差および測定間誤差
測定内誤差の評価のため、高濃度および低濃度のラット組替え型サイトカインおよびケモカインを含む試料を16試料に複製、同一プレートで試験を行った。1 SD (標準偏差) のエラーバーを含む平均値を図3Aに示した。測定間誤差の評価のため、二人の測定者により6枚のプレートで複製試料に関して試験した。1 SD のエラーバーを含む平均値を図3Bに示した。

SearchLight® Assays は殆どのサイトカインおよびケモカインに対してサブピコグラムでの高い感度を示す。検量線は各アッセイで広いダイナミックレンジを示す。 (図 4)
図 4A および B. SearchLight Assay 検量線
A: 15の組換え型タンパクのカクテルを系列希釈し、 15-plex array で検量線が作製した。検量線作成に使用された15 のヒト水溶性タンパク: マトリクスメタロプロテアーゼ (MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-13), 組織メタロプロテアーゼインヒビター (TIMP-1, TIMP-2), 細胞接着因子 (ICAM-1, VCAM-1, E-selectin, L-selectin), アポ血清アミロイドA (A-SAA), CD14
B: 12の組換え型タンパクのカクテルを系列希釈し、 12-plex array で検量線を作成した。ヒトサイトカイン(IL-1beta, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-12p40, IFN-gamma, TNF-alpha), ヒト IL-2 受容体 (IL-2R), ヒト血管成長因子 (VEGF)

共通内容：１plate入り
Cat # 製品内容 測定対象 種 サンプル
タイプ		 サンプル
サイズ(ul/well)
84679 Phosphorylated Kinase Array AKT, JNK, MEK, p38 Human 10 - 50
84699 Angiogenesis Array 1 ANG-2, FGF basic, HB-EGF, HGF, KGF, PDGF-BB, TIMP-1, Tpo, VEGF Human 細胞培養上清,
血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84694 Angiogenesis Array 2 FGF basic, HGF, PDGF-BB, VEGF Human 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84659 Chemokine Array 1 Eotaxin, I-309, IL-8, MCP-1, MDC, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, TARC Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA,
ヘパリン,
クエン酸ナトリウム); 血清		 5 - 50
84729 Chemokine Array 1 Eotaxin, JE/MCP-1, KC/GROα, MCP-5, MIP-1α, MIP-2, RANTES, SDF-1β, TARC Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84707Chemokine Array 1 Fractalkine, KC/GROα, MCP-1, MIP-1α, MIP-2, MIP-3α, RANTES Rat 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84629 Chemokine Array 2 Exodus II, GROα, IP-10, I-TAC, Lymphotactin, MIP-3α, MIP-3β, NAP-2, SDF-1β Human 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 5 - 50
84724Chemokine Array 2 Eotaxin, JE/MCP-1, MIP-1α, RANTES Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84706 Chemokine Array 2 MCP-1, MIP-1α, MIP-3α, RANTES Rat 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84654Chemokine Array 3 MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA、
ヘパリン
クエン酸ナトリウム); 血清		 5 - 50
84725 Chemokine Array 3 KC/GROα, MCP-5, MIP-2, TARC Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84656Chemokine Array 4 Eotaxin, MCP-1, MDC, TARC Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA、
ヘパリン,
クエン酸ナトリウム); 血清		 5 - 50
84624 Chemokine Array 5 GROα, IP-10, MIP-3α, MIP-3β Human 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 5 - 50
84649Cytokine Array IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12 p70, TNFα Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84669 Cytokine Array IFNγ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 p70, TNFα Porcine 細胞培養上清,
血清		 5 - 50
84709Cytokine Array GM-CSF, IFNγ, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNFα Rat 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84716 Cytokine/Chemokine Array Fractalkine, GM-CSF, IFNγ, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, KC/GROα, MCP-1, MIP-1α, MIP-2, MIP-3α, RANTES, TNFα Rat 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84740Inflammatory Array IFNγ, IL-1β, IL-6, TNFα Primate 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84704 Inflammatory Array IFNγ, IL-1β, IL-6, TNFα Rat 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84645Inflammatory Cytokine Array IFNγ, IL-1β, IL-6, TNFα Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84664 Inflammatory Cytokine Array IFNγ, IL-1β, IL-6, TNFα Porcine 細胞培養上清,
血清		 5 - 50
84619Inflammatory Cytokine Array 1 IFNγ, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p70, TNFα Human 細胞培養上清,
血漿(ヘパリン、クエン酸ナトリウム), 血清		 10 - 50
84614 Inflammatory Cytokine Array 2 IFNγ, IL-1β, IL-6, TNFα Human 細胞培養上清, 血漿(ヘパリン、クエン酸ナトリウム), 血清 10 - 50
84614Inflammatory Cytokine Array 3 IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12 p70, TNFα Human 細胞培養上清, 血漿(ヘパリン、クエン酸ナトリウム), 血清 10 - 50
84640 Isotyping Array IgG1, IgG2a, IgG2b, IgA, IgM Mouse 腹水、精製抗体 10 - 50
84739Matrix Metalloproteinase Array 1 MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-13, TIMP-1, TIMP-2 Human 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84734 Matrix Metalloproteinase Array 2 MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2 Human 細胞培養上清, 血漿(EDTA),
血清		 10 - 50
84769Phosphorylated Kinase Array AKT(Ser473), JNK(Thr183, Tyr185), p38(Thr180, Tyr182), ERK1(Thr202, Tyr204), ERK2(Thr185, Tyr187) Human 細胞溶解物 10 - 50
(>1x106 cells/ml)
84689 TH1/TH2 Cytokine Array 1 IFNγ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-8, IL-10, IL-12 p70, IL-13, TNFα Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA,
ヘパリン、クエン酸ナトリウム); 血清		 10 - 50
84684TH1/TH2 Cytokine Array 2 IFNγ, IL-2, IL-4, IL-10 Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA,
ヘパリン、クエン酸ナトリウム); 血清		 10 - 50
84686 TH1/TH2 Cytokine Array 3 IFNγ, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12 p70, IL-13 Human 細胞培養上清; 血漿(EDTA,
ヘパリン、クエン酸ナトリウム); 血清		 10 - 50
84644TH1/TH2 Cytokine Array IFNγ, IL-2, IL-4, IL-10 Mouse 細胞培養上清,
血清		 10 - 50
84665 TH1/TH2 Cytokine Array IFNγ, IL-2, IL-4, IL-10 Porcine 細胞培養上清,
血清		 5 - 50
84705TH1/TH2 Cytokine Array IFNγ, IL-2, IL-4, IL-10 Rat 細胞培養上清,
血漿(EDTA),
血清		 10 - 50





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