  
最大24の異なる特異抗体が同一ウェルにプレスポットされたプレート
Endogen社 SearchLight Infrared Protein Arrays
と赤外蛍光イメージングシステム (LI-COR Biosciences社
OdysseyR または AeriusR Infrared Imaging
System) を組み合わせた定量により少量の試料からサイトカインやバイオマーカーの試料内量比に関するプロフィールを迅速に手に入れることができます。
各キットには、特異抗体がスポットされた96穴プレート、タイター済みビオチン標識検出抗体カクテル、DyLight800標識ストレプトアビジン、凍結標準品、そしてアッセイに必要な全てのバッファーが含まれます。ELISA法をベースにした簡潔なプロトコルは2〜4時間で完了します。キットは製造Lot毎に試験され精度や特異性が保証されます。
ご紹介する既製品（ヒトおよびマウスのサイトカインアレイ）の他にも、Endogen社プロテインメニューから様々なバイオマーカーを自由に選択して組合せるカスタムアレイ作製も可能です。アレイイメージ解析には
SearchLight Array Analyst Software (推奨ソフトウェア)などのアレイ解析ソフトウェアが必要になります。
特徴
- 最大24の抗体を同一ウェルにスポットしたELISA定量により最小限の試料から最大限の情報（サイトカインやバイオマーカーに関するプロフィール）を入手、貴重な時間とコストを大幅に節約
- 殆どの測定対象で検出感度およびダイナミックレンジは発色ELISA法を上回り、試料のサイトカインレベルによる(ダイナミックレンジ内への)希釈も最小限
- 完全に乾燥させたプレートはスキャニングまで安定に保管することが可能（複数プレートを1日に測定するラボや機器を共有しているラボに最適
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複数の捕獲抗体が同一ウェルにスポットされた96穴プレートを使用します。検出にはビオチン標識抗体カクテルを使用しますが、従来ELISA法に非常に類似した簡潔なプロトコルで測定を行います。DyLight800標識ストレプトアビジンからの近赤外蛍光シグナルを赤外イメージャー
(LI-COR Odyssey または Aerius
Infrared Imaging
System)でスキャンします。イメージの解析はアレイ解析用ソフトウェアで行います。未知試料の各タンパク濃度は対応する既知濃度標準物質の検量線から算出します。
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図 1.
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図 2. プロトコル概要
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SearchLight 製品パフォーマンス
各製造lotでスポット一致性QC管理と特異性試験が行われ、抗体の新しい組み合わせによるアレイでは交叉反応や非特異的結合が生じないかが確認されます（図3）。捕獲・検出抗体のペアは最大限の感度と最適なダイナミックレンジが得られるようプレタイターされ、捕獲抗体はプレートにプレスポット、最適なパフォーマンスが簡単に得られるようにデザインされています。
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図 3.
アレイの特異性を試験するため、各組替え型タンパクをアレイに添加、続いてビオチン標識検出抗体カクテルを添加した。第3列、第4列で見られるように、シグナルはアレイに添加された個々のタンパク上でのみ特異的に生じている。 |
SearchLight Data
敗血症患者のサイトカイン値を同齢コントロール（age-matched
controls）と比較したとき、IL-6, IL-8, IL-10
レベルに関して有意の上昇が80％以上の患者で観察された。この技術により非常に限られた試料でサイトカインやバイオマーカーの産生プロフィールを疾病の有無や進行ステージへの関連づけを始めることが出来ます。
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| 図 4..敗血症患者からの血清試料23と通常血清（同齢コントロール）23検体を
1:5 および 1:10 で希釈、
SearchLight Human
IR Cytokine Array で測定した。高レベルの
IL-6 と IL-8 を除く全試料に関しては
1:5 希釈のデータから濃度を算出
(pg/mL)、 敗血試料および通常試料の平均
(pg/mL)
を示す。 |
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| Cat # |
製 品 名 |
測定対象 |
| 84501 |
Human IR Cytokine Array, 12-plex |
IFNg, IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,
IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13,
TNFa |
| 84503 |
Mouse IR Cytokine Array, 12-plex |
IFNg, IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC, IL-10, IL-12p70,
IL-13, TNFa |
| 84504 |
Mouse IR Cytokine Array, 4-plex |
IFNg, IL-1b, IL-6, TNFa |
| キット内容物: |
プレスポットされた96穴プレート |
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ビオチン標識検出抗体カクテル |
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DyLight800標識ストレプトアビジン |
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凍結標準品 |
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サンプル希釈液 |
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洗浄バッファー |
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*Note: IRDye 800CW Labeled Streptavidin, Li-Cor
Biosciences 社 (product # 926-32230) が
SearchLight infrared protein arrays では推奨されています。解析にはArrayVisionソフトウェアが推奨されています。
SearchLight® はPierce Biotechnology,Incの商標です。Odyssey®and Aerius®はLi-Cor
Biosciences,Inc の商標となります。ArrayVisionはImaging
Research社の商標となります。 |
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info@technochemical.com