転写因子は遺伝子のプロモーター領域に結合、発現レベルを調節しているタンパク質です｡転写因子の調節や高次構造、機能性などの欠陥は、癌や炎症といった多くの疾患に関与している事が知られています｡従来の転写因子活性の測定法には、ゲルシフト法や比色法のELISAアッセイがあげられます｡ピアス社のNF-kB p50, NF-kB p65, c-Jun, c-Fos 転写因子活性測定用キットは化学発光検出のELISA法をベースとしたアッセイを採用し、高S/N比・高感度かつハイスループットな使用における使い易さを実感できます｡ 特徴 比色ELISA法の限界感度よりも20-140倍の高感度を実現、高S/N比 3-4時間で完了、96穴Stripプレートでのハイスループットな測定量 活性化Hela核抽出物、競合dsDNA、20×Poly(dI-dC)を含む最適なキット 化学発光シグナルはルミノメーターまたはCCDカメラによる検出が可能 キットにはストレプトアビジンがコーティングされた96穴プレートが2枚含まれ、プレートには各因子が結合するプロモーター領域内の特徴的な塩基配列（共通配列）を持つ二本鎖DNAをビオチン標識して結合させてあります。この二本鎖DNAは活性型の転写因子とのみ結合し、非特異的な結合は減少します｡これにより従来のELISA法よりも、さらに高いシグナル：ノイズ比を実現しました。試料中の活性型転写因子は各DNA配列と結合することで捕捉され、各転写因子に特異的な1次抗体、次いでHRP標識2次抗体とインキュベートされた後、SuperSignal化学発光基質により検出されます。その他、キットにはポジティブコントロール(TNFα活性化Hela核抽出物)・野生型および変異型の競合2本鎖DNA・タンパク質の非特異的結合を最小化するPoly(dI-dC)入りの結合バッファーなどが含まれます。 Figure 2. 細胞核抽出物によるPierce EZ-Detect NFκ B p50 と他社製品との感度比較. TNF-αにより誘導したHela細胞と非誘導のHela細胞の核フラクションを抽出し、各抽出物をEZ-Detect NFκ B p50 Kit (化学発光法) と発色法ベースの他社Aおよび他社C製品と同様に、インキュベートして検出した。化学発光検出はルミノメーター、発色法検出は各社の製品取扱説明書に従った波長でプレートリーダーにより行った。誤差範囲は標準偏差（1 SD）を示す。 Figure 3. 細胞全抽出物の Pierce EZ-DetectNFκ B p65 と 他社競合製品との比較 TNF-αにより誘導したHela細胞と非誘導のHela細胞の全フラクションを抽出し、各抽出物をEZ-Detect NFκ B p50 Kit (化学発光法) と発色法ベースの他社Aおよび他社C製品と同様に、インキュベートして検出した。化学発光検出はルミノメーター、発色法検出は各社の製品取扱説明書に従った波長でプレートリーダーにより行った。誤差範囲は標準偏差（1 SD）を示す References Karin, M., et al. (2002). NF-kappaB in cancer: from innocent bystander to major culprit. Nature Rev. Cancer 2(4), 301-310. Shaulian, E. and Karin, M. (2001). AP-1 in cell proliferation and survival. Oncogene 20(19), 2390-2400. Baldwin, A.S., Jr. (1996). The NF-kappa B and I kappa B proteins: new discoveries and insights. Annu. Rev. Immunol. 17(1), 3-9. Karin, M. and Lin, A. (2002). NF-kappa B at the crossroads of life and death. Science 3(3), 221-227. Benotman, A.M., et al. (1997). Nonisotopic quantitative analysis of protein-DNA interactions at equilibrium. Anal. Biochem. 250(2), 181-185. McKay, I.A., et al. (1998). An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of agents which interfere with DNA binding activities of transcription factors ? exemplified by NF-IL6. Anal. Biochem. 265(1), 28-34. Renard, P, et al. (2001). Development of a sensitive multi-well colorimetric assay for active NF-kappaB. Nucleic Acids Res. 29(4), e21. Brivanlou, A.H. and Darnell, J.E., Jr. (2002). Signal transduction and the control of gene expression. Science 295, 813-818. Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size 価　格 89858 EZ-Detect NF-κB p50 Transcription Factor Kit(96-well plate 2枚分の試薬入り) Kit \107,000 89859 EZ-Detect NFκB p65 Transcription Factor Kit (96-well plate 2枚分の試薬入り) Kit \107,000 89860 EZ-Detect c-Fos Transcription Factor Kit(96-well plate 2枚) Kit \107,000 89861 EZ-Detect c-Jun Transcription Factor Kit (96-well plate 2枚分の試薬入り) Kit \107,000 キット内容(上記の各キット製品の構成は下記の通りです) Two 96 well-assay plates 5X Binding Buffer 20X Poly dI･dC Primary Antibody Antibody Dilution Buffer HRP-conjugated Secondary Antibody Luminol/Enhancer Solution Stable Peroxide Solution 2 Plate Sealers 10X Wash Buffer Wild Type and Mutant Duplex Activated HeLa cell nuclear extract (positive control) 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com

テクノケミカル（株）[ENDOGEN]EZ-Detect Fig1

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