サイトカイン分泌性 細胞カウント用 キット ELISPOTとはサイトカイン等を分泌する細胞数を特異抗体により測定する技術です。各Wellのボトムには抗体が固定されたPVDF膜が使用され、0.5×10の7乗 cells/mlの細胞懸濁溶液をWellに添加、静置することで検出されるスポットを、顕微鏡やELISPOTリーダー等の光学機器によりカウントします。 　　　 特徴 様々な刺激因子・細胞処理・治療による免疫応答のモニター 抗原特異的なCD4+・CD8+・T細胞応答の定量 数日を要するin vitroでの前処理(T細胞の増殖)が不要、放射性同位体も不要 分泌性サイトカインを検出、高い特異性と感度 細胞数1/10万の頻度で応答を測定、細胞数1個単位の精度でサイトカイン分泌を定量 炎症・ワクチン開発などの研究、臨床試験のモニターに有効 凍結細胞でのELISPOT、測定後のクローニング・増殖試験・フローサイトメトリーも可能 １マウス抗体ヒト IFNγコート済みのPVDF膜ベースのプレート ５ビオチン標識ヒトIFNγ検出抗体を添加、IFNγに結合させる ２細胞は刺激因子と共にプレートに添加。IFNγが細胞から分泌される ６アルカリホスファターゼ(AP)標識ストレプトアビジンを添加、ビオチン標識検出抗体に結合させる。 ３IFNγはプレート上の抗ヒトIFNγ抗体に捕獲される ７ウェルにＡＰと反応する沈降性基質を添加、検出する。 ４細胞および未結合のタンパク質は洗浄・除去される。 ８スポット数を検定する。 図１．　ＥＬＩＳＰＯＴ(Human　IFNγ　ELISPOT)キット概要 Human IFNγ ELISPOT Natural Sample Analysis 組み替え型 ヒトIFNγ 未刺激 PHA Con A PMA　＋ lonomycin 検体１ 1 SFC 145 SFC 721 SFC 780 SFC 検体２ 0 SFC 12 SFC 41 SFC 398 SFC Cat # 製　　品　　名 Pkg. Size ELHIFNG Human IFN Gamma ELISPOT Kit (96-well plate 2枚) Kit 　 キット内容(スターターキットには抗体が含まれません)： ○　サイトカイン捕獲抗体コート済み　96穴メンブレンプレート・・・・２枚 ○　ビオチン標識検出抗体 ○　ストレプトアビジン・アルカリホスファターゼ標識物 ○　１０Ｘ　洗浄バッファー ○　希釈用バッファー ○　基質溶液 〒113-0021 東京都文京区本駒込1-27-9 TEL 03-3947-7310　FAX 03-3947-7306 info@technochemical.com